[发明专利]MIF抑制剂及其使用方法

说明书

本文提供了治疗由增强的聚[ADP‑核糖]聚合酶1(PARP‑1)活化导致的疾病例如帕金森病的方法，所述方法通过抑制巨噬细胞移动抑制因子(MIF)核酸酶活性来治疗所述疾病。

相关申请

本申请根据35 U.S.C.§119(e)要求属于2016年9月2日提交的美国临时申请第62/383,209号的权益，其在此被通过引用以其整体并入本文。

拨款信息：本发明是在国立卫生研究院拨款K99/R00 NS078049，DA000266，R01NS067525，R37 NS067525和NS38377的政府支持下完成的。政府在本发明中拥有某些权利。

发明背景

发明领域

本发明整体上涉及巨噬细胞移动抑制因子(MIF)，并且更具体地涉及MIF抑制剂在治疗疾病中的用途。

背景

聚(ADP-核糖)(PAR)聚合酶-1(PARP-1)是被DNA损伤激活的重要的细胞核酶，其在DNA损伤处促进DNA修复(1)。PARP-1的过度活化会导致被称为依赖性细胞死亡(parthanatos)的不依赖胱天蛋白酶(caspase)的固有细胞死亡程序(2,3)，该程序在许多器官系统受到大量毒性损伤后发挥突出的作用(4,5)，所述毒性损伤包括中风和心肌梗死后的缺血再灌注损伤、炎性损伤、活性氧物质诱导的损伤、谷氨酸兴奋毒性和神经退行性疾病例如帕金森病和阿尔茨海默病(2，4，6)。与PARP-1是关键的细胞死亡介导因子的观点一致，PARP抑制剂或PARP-1的基因缺失针对这些和其他细胞损伤范例和人类疾病模型有着意义深远的保护作用(2，4，5，7)。

奠定依赖性细胞死亡的分子机制涉及PAR-依赖性凋亡诱导因子(AIF)从线粒体释放并转位到细胞核，导致DNA片段化为20-50kb的片段(2，8-11)。AIF本身没有明显的核酸酶活性(2)。虽然已经有研究表明CED-3蛋白酶抑制剂(CPS)-6，一种秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans(C.elegans))中的核酸内切酶G(EndoG)同源物，与蠕虫AIF同源物(WAH-1)协作促进DNA降解(12)，但是EndoG似乎在哺乳动物中的短暂局灶性脑缺血后的PARP-依赖性染色质溶解和细胞死亡中不发挥重要作用(13)。在依赖性细胞死亡过程中负责染色质溶解的核酸酶尚不被知晓。

发明概述

本发明基于将巨噬细胞移动抑制因子(MIF)鉴定为PARP-1依赖性的AIF-相关核酸酶(PAAN)。

在一个实施方案中，本发明提供了治疗受试者中的与增强的聚[ADP-核糖]聚合酶1(PARP-1)活化相关的疾病的方法。该方法包括向受试者施用治疗有效量的巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的核酸酶活性抑制剂，从而治疗或减轻该疾病的症状。

在一个方面，疾病是炎症性疾病。另一方面，炎症性疾病是阿尔茨海默病、强直性脊柱炎、关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎、银屑病关节炎、哮喘动脉粥样硬化、克罗恩病、结肠炎、皮炎憩室炎、纤维肌痛、肝炎、肠易激综合征、系统性红斑狼疮、肾炎、溃疡性结肠炎或帕金森病。

在一个实施方案中，该抑制剂是例如来自混合(hybrid)大环rapafucin文库的大环rapafucin化合物。

本发明还提供了筛选巨噬细胞移动抑制因子(MIF)抑制剂的方法，包括例如以下的步骤：固定单链的胺修饰的MIF靶DNA，随后在有和没有来自大环rapafucin文库的化合物的情况下孵育MIF；将单链的胺修饰的MIF靶DNA与生物素化的DNA杂交，该生物素化的DNA与单链的胺修饰的MIF靶DNA互补，接下来与链霉亲和素酶缀合物一起孵育，接下来与底物孵育，其中该链霉亲和素酶缀合物作用于该底物。将在有文库化合物情况下的MIF的吸光度和没有文库化合物情况下的MIF的吸光度进行比较，以便基于吸光度的变化来确定化合物是否为抑制剂。

附图简述