[发明专利]modRNA的细胞特异性表达

权利要求书

1.一种用于细胞特异性表达感兴趣基因(GOI)的表达调控系统，其包含：

第一核酸，其编码特异性结合靶细胞特异性miR的microRNA(miR)识别元件(在其3'UTR附近)和翻译抑制蛋白；和

第二核酸，其包含结合翻译抑制蛋白的抑制蛋白相互作用基序，和编码感兴趣蛋白的基因。

2.根据权利要求1所述的系统，其中所述第一和第二核酸是修饰的RNA(modRNA)。

3.根据权利要求1或2所述的系统，其中靶细胞是心肌细胞，靶细胞miR选自miR1、miR208和miR1加miR208。

4.根据权利要求1或2所述的系统，其中翻译抑制蛋白是L7Ae，抑制蛋白相互作用基序是k-基序。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的系统，其中感兴趣蛋白是报告蛋白或选择标记物。

6.根据权利要求5所述的系统，其中报告蛋白或选择标记物是荧光蛋白或抗生素抗性标记物。

7.根据权利要求5或6所述的系统，其中报告蛋白或选择标记物选自绿色荧光蛋白(GFP)、核GFP(nGFP)、无活性的人CD25(ihCD25)和无活性的小鼠CD25(imCD25)。

8.根据权利要求1、2或3所述的系统，其中感兴趣蛋白是细胞周期诱导蛋白。

9.根据权利要求8所述的系统，其中细胞周期诱导物蛋白选自Lin28和Pkm2。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的系统，其中所述第一核酸包含SEQ ID NO：2、SEQID NO：3或SEQ ID NO：4的核苷酸序列。

11.根据权利要求1-11中任一项所述的系统，其中所述第二核酸包含SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：8的核苷酸序列。

12.一种组合物，其包含权利要求1-11中任一项所述的第一核酸和第二核酸。

13.实施方案13所述的组合物，其中所述表达产物通过体外转录获得。

14.一种用于在感兴趣细胞中表达蛋白质的方法，所述方法包括使所述细胞与编码对所述感兴趣细胞的miR靶标特异性的抗miR的modRNA接触，其中所述modRNA

15.一种在心肌细胞(CM)中表达蛋白的方法，所述方法包括使所述CM与编码对心肌细胞miR靶标特异性的抗miR的modRNA接触，其中所述modRNA包含SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：3的核苷酸序列。

16.一种载体，其包含权利要求1-11中任一项所述的第一核酸和第二核酸。

17.一种表达调控试剂盒，其包含权利要求1所述的第一核酸和第二核酸或包含含有权利要求1所述的第一核酸和第二核酸的载体。

18.一种在心肌梗塞(MI)后在体外或体内诱导/再激活新生儿或成年心肌细胞增殖的方法，所述方法包括使所述心肌细胞的一部分与第一modRNA和第二modRNA接触，所述第一modRNA编码心肌细胞特异性miR的识别元件和翻译抑制蛋白，所述第二modRNA编码结合翻译抑制蛋白的k-基序和细胞周期诱导物基因。

19.根据实施方案4所述的方法，其中细胞周期诱导物基因选自Lin28和Pkm2以及细胞周期蛋白D2。