[发明专利]由浮力实现的分离方法和系统

权利要求书

1.一种由浮力实现的分离方法，其用于从包括各种不同细胞的样品分离出由多种不同细胞表面标志物区分的稀少子类别细胞，包括：

a)将样品置于容器中；

b)添加具有柔性壳的第一柔性壳微泡，所述微泡具有包封气体的内泡壁和与第一抗体缀合的外泡壁，所述第一抗体能够与包含在液体样品中第一子类别细胞的第一细胞表面标志物结合；

c)孵育足以实现第一抗体与第一细胞表面标志物之间的相互作用，将第一抗体与第一细胞表面标志物结合的时间段；

d)通过漂浮使具有与第一微泡结合的第一子类别细胞的第一微泡与样品的其余部分分离；

e)从容器移除废物，包括样品内除了第一子类别细胞之外的细胞；

f)破坏第一微泡，使第一组分离的细胞不再有浮力；

g)添加具有柔性壳的第二柔性壳微泡，所述微泡具有包封气体的内泡壁和与第二抗体缀合的外泡壁，所述第二抗体能够与包含在第一子类别细胞中的第二子类别细胞的第二细胞表面标志物结合；

h)孵育足以实现第二抗体与第二细胞表面标志物之间的相互作用，将第二抗体和至少一种第二细胞表面标志物结合的时间段；

i)通过漂浮使具有与微泡结合的第二子类别细胞的微泡与样品的其余部分分离；和

j)从容器移除废物，包括第一子类别细胞内除了第二子类别细胞之外的细胞；

所述方法是用包括如下的系统实施的：

容器(3)，其具有限定内部容器空间的内壁；

柱塞(5)，其与内壁密封连接，和相对于内壁可移动的部件；

带有可打开和可关闭的阀(8，9)的端口，其将内部空间连接到环境，用以实现待供给的气体、液体和固体材料进入内部空间和离开内部空间；和

内部容器空间内的柔性壳微泡(2)，所述具有柔性壳的微泡(2)具有包封气体的内泡壁和与第一抗体缀合的外泡壁，所述第一抗体能够与包含在液体样品中的第一子类别细胞的第一细胞表面标记结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一和第二细胞表面标志物是CD8、CD62L、CD45RA、CD3和CD28中之一。

3.权利要求1所述的方法，其还包括：

k)破坏第二微泡，使得第二组分离的细胞不再有浮力；和

I)针对第三子类别细胞，通过应用另外的与先前未使用的抗体缀合的柔性壳微泡重复步骤g)至k)，所述先前未使用的抗体能够与先前未被靶向的靶细胞表面标志物结合。

4.权利要求3所述的方法，其中所述细胞表面标志物是CD8+、CD62L+和CD45RA+，并且所述稀少子类别细胞是初始T细胞。

5.权利要求4所述的方法，其还包括针对第n子类别细胞，通过应用另外的与先前未使用的抗体缀合的柔性壳微泡重复步骤l)，所述先前未使用的抗体能够与先前未被靶向的靶细胞表面标志物结合。

6.权利要求1所述的方法，其还包括：从容器移除废物的方法步骤包括从容器的端口移除废物。

7.权利要求1所述的方法，其还包括通过阴性选择从容器移除废物的方法步骤，所述方法步骤通过将这些不需要的细胞与各自的将漂浮至容器的液体表面的微泡结合，并且从容器的端口移除与各自的微泡结合的这些不需要的细胞来从容器移除不需要的细胞的形式的废物。

8.权利要求6所述的方法，其还包括：从容器移除废物的方法步骤包括在容器内移动柱塞。

9.权利要求7所述的方法，其还包括：从容器移除废物的方法步骤包括在容器内移动柱塞。

10.权利要求1所述的方法，其还包括：破坏第一、第二和随后的微泡的方法步骤包括增加微泡所经受的压力。

11.权利要求10所述的方法，其还包括：增加微泡所经受的压力包括在容器内移动柱塞。