[发明专利]治疗性的活性复合物

说明书

本发明提供了一种生物活性复合物，该复合物包含长度最多为50个氨基酸的肽与油酸或其盐，所述肽包含具有膜干扰活性的蛋白质的α‑螺旋结构域或其变体，所述变体缺乏半胱氨酸残基，前提是所述蛋白质不是α‑乳清蛋白。这种类型的复合物可用于治疗，特别是癌症的治疗。

技术领域

本发明涉及一类具有治疗活性的肽，特别是作为抗癌或抗肿瘤制剂的肽。制备这些肽的方法以及含有它们的药物组合物构成了本发明的另一方面。

背景技术

理想情况下，新型癌症治疗应将疗效与对靶向肿瘤的选择性结合起来，并且新的靶向疗法可以更精确地起作用。然而，组织毒性和副作用仍然是常态，并且新的肿瘤特异性细胞死亡机制的概念受到了合理的怀疑。然而，最近对某些蛋白质-脂质复合物的肿瘤杀伤作用的研究表明，肿瘤细胞可能具有保守的细胞死亡机制，使其区别于正常的分化细胞。这些蛋白质-脂质复合物插入脂质双层，通过扰乱肿瘤细胞的膜结构从而引发细胞死亡。随后的关键细胞功能的内化和抑制将肿瘤细胞与健康的分化细胞区分开来，因此，肿瘤细胞被杀死，而正常的分化细胞存活。

这些特性使蛋白质-脂质复合物成为引人关注的候选药物，其具有广泛的肿瘤杀伤活性和明确的肿瘤特异性。在部分人乳中偶然被发现的HAMLET(对肿瘤细胞致命的人类α-乳清蛋白)说明了这种方法的可行性。HAMLET以快速的动力学杀死许多不同的肿瘤细胞，并在结肠癌、胶质母细胞瘤和膀胱癌的动物模型中显示出治疗功效。研究者驱动的临床试验表明，HAMLET对皮肤乳头状瘤具有局部活性，并诱导膀胱癌患者死亡的肿瘤细胞脱落到尿液中。

α-乳清蛋白是人乳中最丰富的蛋白质，由于作为乳糖合成酶复合物的特异性底物，其对哺乳期哺乳动物的存活至关重要。HAMLET通过球状α-乳清蛋白的部分去折叠和去质子化的油酸的结合形成，二者的化学计量比为1/4-8。

还有许多衍生自α-乳清蛋白的肽被发现其本身具有治疗效果(参见例如WO2012/069836)。

发明内容

申请人已经鉴定出特异性α-乳清蛋白肽结构域作为肿瘤细胞识别和死亡的功能性配体。来自不同组织的肿瘤细胞之间共有的肽反应性表明，油酸存在时α-螺旋肽被肿瘤细胞膜识别，并且这种相互作用在体内的癌细胞和已形成的癌症中触发保守的死亡反应。因此，如针对已知的基于α-乳清蛋白的α-螺旋结构域的复合物所做的工作示例的，包含这些肽的复合物显示出广泛的肿瘤杀伤活性。然而，申请人惊奇地发现这些效应可以推广到具有膜干扰活性的其他α-结构域肽。

这项工作确定了一种新的、通用的机制，通过该机制，α-螺旋肽可以靶向并杀死肿瘤细胞。申请人发现膜相互作用的肽结构域形成了具有广泛肿瘤杀伤活性的油酸复合物。这一概念的例子是α-乳清蛋白的N-末端α螺旋，其侵入肿瘤细胞并积聚在核散斑体中，在那里其通过对散斑体成分SC-35、PKC和Pol II的直接作用来抑制转录。这种“功能的获得(gain-of function)”是针对一系列α肽而重现的，这些α肽具有广泛的序列，包括COPII家族中的Sar1，其中当其与油酸盐混合时，α-螺旋的膜整合肽获得肿瘤杀伤活性。相反，这些蛋白质的β折叠结构域被分选到溶酶体中以进行降解。合成的α-1肽形成治疗性油酸盐复合物，其降低了鼠膀胱癌模型中的肿瘤负荷。这些发现表明，在油酸存在时肿瘤细胞识别α-螺旋肽基序，并通过激活肿瘤细胞死亡的保守机制来应对。

如本发明所述，其提供了一种生物活性复合物，所述复合物包含长度最多为50个氨基酸的肽与油酸或其盐，所述肽包含具有膜干扰活性的蛋白质的α-螺旋结构域或其变体，所述变体缺乏半胱氨酸残基，前提是所述蛋白质不是α-乳清蛋白。

发现肽的精确序列不是关键之处，反而包含α-螺旋结构域通常足以提供活性复合物是意料之外的。

如本文所用，术语“α-螺旋结构域”是指肽的二级结构中的基序，其中形成右旋的卷曲构象或盘旋构象(螺旋)，其中每个主链N-H基团提供一个氢键给沿着肽序列位于前三个或四个残基的氨基酸的主链C＝O基团。