[发明专利]大规模治疗性生产记忆样NK细胞的方法和组合物

权利要求书

1.一种增加记忆样NK细胞数量的方法，包括：a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；和b)通过使所述细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触，扩增步骤a)的预活化的NK细胞。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述NK细胞获自未经选择的外周血单核细胞群。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少一种或多种刺激性细胞因子选自由IL-12、IL-15和IL-18组成的组。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法包括使所述NK细胞与3种刺激性细胞因子接触。

5.根据权利要求3所述的方法，其还包括使所述NK细胞与选自由以下组成的组中的细胞因子接触：4-1BBL、IL-2、IL-21、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10。

6.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与IL-12、IL-15或IL-18在体外、体内或离体接触。

7.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与所述一种或多种刺激性细胞因子接触约6至约24小时。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞包含与膜插入肽偶联的一种或多种刺激性细胞因子。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述膜插入细胞因子包含能够膜插入的融合肽，对脂质双层具有亲和力，并且其中所述融合肽包含IG4、CD4的片段或其组合。

10.根据权利要求8所述的方法，其中与膜插入肽偶联的所述一种或多种刺激细胞因子是由重组DNA编码的融合蛋白。

11.根据权利要求8所述的方法，其中所述膜插入肽包含人Fc、GPI、跨膜T细胞受体或pHLIP。

12.根据权利要求8所述的方法，其中所述一种或多种刺激性肽选自由4-1BBL、IL-2、IL-12、IL-18、IL-21、MICA/B、ULBP2、ICAM-1、2B4、BCM1/SLAMF2、CD155、CD112、Jagged1、Jagged2、δ-样1(Dll1)、δ-样3(Dll3)、δ-样4(Dll4)、Pref-1、DNER、Jedi、SOM-11、wingless、CCN3、MAGP2、MAGP1、TSP2、YB-1、EGFL7、CCR7、DAP12和DAP10组成的组。

13.根据权利要求1所述的方法，其中使所述NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞在体外、体内或离体接触。

14.根据权利要求1所述的方法，其中使步骤a的NK细胞与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、45天或60天。

15.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤b)之后静息扩增的记忆样NK细胞。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述细胞是静息了至少(在其之间或不超过)1天、2天、3天、4天或5天的记忆样NK细胞。