[发明专利]大规模治疗性生产记忆样NK细胞的方法和组合物

说明书

公开了涉及记忆样NK细胞扩增的组合物和方法。

背景技术

来自基因型HLA匹配的兄弟姐妹的造血干细胞移植(HSCT)改善了患有血液癌症恶性肿瘤和骨髓衰竭综合征的患者的长期存活。每年有超过10,000名美国人患上危及生命的疾病，治愈的唯一希望就是从无关的捐献者或脐带血单位进行骨髓移植。然而，超过70％的可能从同种异体干细胞移植中受益的患者没有匹配的同胞供体。这些情况延误了治疗，因此有必要采用不太理想的部分不匹配供体，这最终会导致移植物抗宿主病(GVHD)、移植失败和复发的发生率增加，所有这些都会大大减少患者生存。

移植过程的持续时间和昂贵的财务、心理和健康负担构成了额外的限制。因此，来自无关供体的HSCT的应用仅限于更年轻、更健康的患者，其具有可以承受该过程的适当的社会经济支持。由于无法根除残留的癌细胞导致的高复发率带来了进一步的挑战。虽然HSCT被认为是有疗效的，但癌症复发率却是惊人的。因此，需要新的、更有针对性的免疫疗法，其将更有效、优选地不需要匹配的供体。于20世纪90年代引入了用于治疗HSCT后急性髓性白血病(AML)复发的供体淋巴细胞输注(DLI)。该方法包括将来自原始供体的淋巴细胞给药于患有复发性疾病的AML患者。然而，临床益处是有限的，并且仅在少数具有较小肿瘤负荷的患者中观察到，并且T细胞介导的GVHD经常进一步恶化结果。

大量的供体淋巴细胞输注介导的移植物抗肿瘤(GVT)效应可能是由于自然杀伤(NK)细胞。从供体血液中分离的NK细胞的输注可产生有益的GVT效应而不引起GVHD。临床前和临床数据显示NK细胞输注的有效性导致完全缓解而没有任何GVHD。因此，与自体移植相结合或作为独立治疗的NK细胞输注，为那些没有匹配供体、经历复发或不具备移植资格的患者提供创新且可能非常有效的替代方案。然而，这些NK细胞治疗产生了对NK细胞扩增的需求，其数量足以提供治疗性治疗。因此，非常需要旨在增加类似记忆的NK细胞数量的新的和改进的方法。

所公开的方法和组合物的其他优点将部分地在下面的描述中阐述，并且部分地将从描述中理解，或者可以通过实践所公开的方法和组合物来了解。借助于所附权利要求书中特别指出的元件和组合，将实现和获得所公开的方法和组合物的优点。应当理解，前面的一般性描述和下面的详述都只是示例性和说明性的，并不是对要求保护的本发明的限制。

发明内容

本申请一般涉及包含记忆天然杀伤(NK)细胞的组合物和方法。更具体地，本申请涉及记忆天然杀伤(NK)细胞的体内、离体或体外刺激和扩增，其能够攻击和杀死癌细胞、病毒感染的细胞和某些免疫细胞。

本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，包括a)通过使至少一种NK细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化NK细胞；b)通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的囊泡接触(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或FC21饲养细胞接触)来扩增步骤a)的预活化的NK细胞。在一些方面，是用于增加记忆样NK细胞数量的方法，其进一步包括在预活化步骤a)和/或扩增步骤b)之后洗涤和/或在扩增步骤b)后静息记忆样NK细胞。在其他方面，本文公开了其中扩增步骤和预活化步骤被逆转的方法，使得所述方法包括通过使所述细胞与包含NK细胞效应剂的囊泡接触来扩增NK细胞(例如，与PM21颗粒、EX21外泌体或者FC21饲养细胞接触)并且然后通过使所述细胞与至少一种或多种刺激性细胞因子接触来预活化扩增的NK细胞。

在一个方面，本文公开了增加记忆样NK细胞数量的方法，其中用于所公开方法的NK细胞获自未经选择的外周血单核细胞群。

还公开了任何前述方面的方法，其中所述至少一种或多种刺激性细胞因子选自IL-12、IL-15和IL-18。在一个方面，该方法能够包括使NK细胞与3种刺激性细胞因子接触。

还公开了任何前述方面的方法，其中使NK细胞与IL-12、IL-15或IL-18在体外、体内或离体接触。