[发明专利]切割事件转导方法和产品

说明书

本文中公开了并入借助分子切割事件而活化的酶介导反应步骤和/或级联放大方法的方法和产品，和检测测定法中切割过程的方法和产品，其中结合事件可以用来选择性地检测目的分析物。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年11月16日提交的名为“切割事件转导方法”的美国临时申请号62/423,087的权益。前述文献的完整内容因而在通过引用的方式并入本文。

背景技术

在一些感知应用中，需要有能力在分子切割出现时检测。在现有技术方法和装置中，这可能是困难的，因为正在分析的样品的特性经常仅存在微小变化或不存在可检出变化。感知切割事件可以用于直接检测本身切割某分子的分析物，或作为目的分析物和读出信号之间化学反应链的部分间接地检测。现有技术中的直接检测例子是检测作为凝血反应的部分所生成的凝血酶。在现有技术方法和装置中，例如，通过切割释放电活性或有色种类的底物，检测到凝血酶。现有技术中的间接检测例子是其中待检测的DNA或RNA与其他链DNA杂交以形成复合体，称作MNAzyme，所述复合体可以切割含有RNA键的底物DNA链。可以例如，通过分离引起荧光信号生成的荧光基团和猝灭剂基团，检测到对底物DNA的切割。

当分析物种类的所需浓度处生成的信号太小，以致于不容易检检出时，这些现有技术方法可以遭遇缺少灵敏度困扰。因此需要找到放大这种信号的方式。传统使用的化学放大信号的方法是拥有酶介导的反应作为信号生成化学的部分。酶可以循环许多次并且因此响应于存在单个分子或事件发生而产生多个分子。导致所生成信号级联式增加的反应方案在放大来自低浓度分析物的信号方面特别有利。

本发明寻求通过提供有效并入借助分子切割事件而活化的酶介导反应步骤和/或级联放大方法的分子实体和方法，克服现有技术中的这个缺陷。还公开了在测定法中利用本发明或其他切割检测方法的新方法，其中结合事件用来选择性地检测目的分析物。

发明简述

本文中公开了并入借助分子切割事件而活化的酶介导反应步骤和/或级联放大方法的分子实体和方法，和检测测定法中切割过程的方法和产品，其中结合事件可以用来选择性地检测目的分析物。

本发明的一些实施方案涉及可以包含酶和酶抑制剂复合体的分子实体。酶抑制剂复合体可以包括结合至接头部分的抑制剂部分。接头部分可以有能力与酶系留并且可以有能力受切割剂切割。当接头部分与酶系留时，酶的活性可以受抑制；当接头部分遭切割时，酶的活性可以增加。酶的活性可以可逆。

本发明的一些实施方案涉及用于检测切割剂存在情况的分子实体。分子实体可以包括借助在切割剂存在下发挥切割作用的接头结合至可逆性酶抑制剂的酶。

在一些实施方案中，接头部分可以包含切割位点、远端侧和内侧。内侧和远端侧在切割位点的对面。抑制剂部分可以在内侧上的位置与接头部分连接并且接头部分可以有能力在远端侧上的位置借助反应性种类与酶连接。

在一些实施方案中，接头部分可以包括至少两个切割位点、中间区域和至少两个远离中间区域的侧部。切割位点可以位于每个远端侧和中间区域之间。抑制剂部分可以在中间区域内与接头部分连接并且接头部分能够在远端侧上的位置借助反应性种类与酶连接。在一些实施方案中，反应性种类能够与酶形成共价键。反应性种类能够直接或借助交联剂与酶形成共价键。在一些实施方案中，通过施加紫外线、交联剂、活化剂、催化剂、热或其他等，接头部分的远端可以连接至酶。

在一些实施方案中，抑制剂部分可以按照混有酶浓度的酶抑制剂复合体浓度与酶结合。这些浓度可以高于分析试剂中待用的抑制型酶复合体浓度。

在一些实施方案中，酶可以是氧化还原酶、切割酶，等。