[发明专利]表面结合红细胞抗原特异性抗红细胞抗体的存在性分析

说明书

一种检测人类血清中血型抗原特异性抗体的分析流程，将待分析的血清与带有天然表面血型抗原的红细胞膜接触后，血清中含有针对表面抗原的其他抗体，然后检测凝集情况，凝集说明存在至少一种红细胞膜表面抗原特异性抗体。其他抗体产生的凝集反应被阻止，从而可检测抗血型抗体。

本发明涉及在人类血清中检测血型抗原特异性抗体的分析流程。该流程中，待分析的血清先接触带有天然表面血型抗原的红细胞膜，然后检测凝集情况，凝集说明存在至少一种红细胞膜表面抗原特异性抗体。另外，该方法也可以另外添加试剂，或采用促使凝集的条件，如抗人抗体，清蛋白，聚乙二醇(PEG)和(或)蛋白水解酶，和(或)在低离子强度溶剂中接触含有红细胞膜的血清(LISS)。

背景技术

WO 2006/099875描述了一种针对CD38的治疗抗体，用于治疗多发性骨髓瘤。

Chapuy等人在2015年出版的Transfusion第55卷第1545-1554页中描述了一种用于治疗多发性骨髓瘤的抗CD38抗体，称为Daratumumab(DARA)，它在检测血清中抗血型抗体的血清分析中可导致红细胞(RBC)的凝集。DARA导致的红细胞凝集可能被含二硫苏糖醇或胰蛋白酶的红细胞处理所瓦解，导致CD38变性或清除，或通过添加抗DARA特异型抗体或可溶性CD38所瓦解。

众所周知，Coombs测试中，在存在抗人抗体的环境下，将血清接触红细胞，用来检测血型抗原特异性人类血清抗体。抗人抗体作为针对细胞表面结合抗原的交叉抗体，将导致肉眼可见的红细胞凝集。

发明内容

本发明旨在提供检测血清中抗血型抗体的其他分析流程。该方法尤其适用于血清中包含血细胞表面抗原(非血型抗原)特异性的抗体，特别是人为加入血清的红细胞表面抗原特异性抗体，如向患者注射含抗体的药剂。

发明描述

本发明中，通过依据申请权利的分析流程实现目标，尤其是检测针对血型抗原的抗体分析方法，即用红细胞膜接触待分析的血清，然后检测血清中抗体与红细胞膜的结合情况。该流程特征在于，血清接触红细胞之前，先添加至少一种红细胞膜第一表面抗原特异性的结合多肽。该结合多肽缺少人类Fc区。事先添加的结合多肽会遮蔽红细胞膜第一抗原，从而阻止了血清中的抗体与第一抗原结合，该血清随后接触红细胞膜。本流程中，通过观察红细胞凝集来检测血清抗体与红细胞膜的结合情况，另外，还可添加第二种针对血清抗体Fc区的标记抗体以观察结合情况，检测血清中第一抗原特异性抗体存在性的结果显示，无抗体与第一抗原结合。这说明，针对红细胞膜第一表面抗原的结合多肽与红细胞结合后，妨碍了血清中第一抗原特异性抗体的检测，但可以检测后续与红细胞表面其他抗原结合的其他血清抗体。

结合多肽的特征在于缺少人类Fc区，即，IgG型抗体中包含的2条链，每条链各含一个C_H2和一个C_H3结构域。结合多肽构成对红细胞表面第一抗原高度特异性的结合部位，该结合多肽可以是天然的，也可以是人工合成的，可以在一个或多个关联多肽链上。这种结合多肽包含拥有至少1个、最好2个区构成至少一个专门针对第一抗原结合部位的蛋白质，如，缺少Fc区的抗体碎片、F(ab)₂碎片、Fab碎片、单链可变功能域碎片(scFv)、小分子抗体、纳米抗体、双体、带有非人Fc区的抗体。

一般来说，本文所指血清的抗体亦指血清抗体。红细胞膜接触针对第一抗原的结合多肽前，第一抗原特异性血清抗体可与带有第一抗原作为表面抗原之一的红细胞膜结合。