[发明专利]免疫原性缀合物及其用途

说明书

提供的技术处于这样的领域中：将天然的、非去污剂提取的外膜囊泡(nOMV)与抗原缀合以形成nOMV‑抗原缀合物，其特别可用于免疫原性组合物和免疫；还提供了制备和使用此类缀合物的方法。

本发明处于这样的领域中：将“天然的”、非去污剂提取的外膜囊泡(nOMV)与抗原缀合以形成nOMV-抗原缀合物的领域，其特别可用于免疫。

背景技术

抗原与载体的缀合是用于改善免疫原性的确立的程序，尤其是对于糖。例如，细菌荚膜糖是天然T-细胞非依赖性抗原，其产生缺乏几种重要特性的免疫应答。与载体部分的缀合将这些糖转化为T-细胞依赖性抗原，其然后可以产生免疫记忆效应，并且还在幼儿中引发有效的免疫应答。

此类缀合物中的蛋白载体的一种已知来源是来自脑膜炎奈瑟氏球菌血清群B的外膜蛋白复合物(OMPC)(例如参见EP-0467714, Merck & co.)，其已被包括在批准的流感嗜血杆菌B缀合疫苗中作为载体。OMPC也已被用作蛋白缀合物中的载体。根据现有技术，OMPC经由蛋白残基与抗原缀合，所述蛋白残基可以被活化或化学修饰，以便更好地与选择的抗原进行缀合。

Wu等人 (PNAS USA 2006; 103(48): 18243–18248) 报道了Pfs25H(一种人疟疾传播阻断蛋白)与OMPC的缀合产生Pfs25H-OMPC缀合物疫苗，其在小鼠中产生抗-Pfs25HELISA反应性方面的效力是类似剂量的单独的Pfs25H的>1,000倍。OMPC与Pfs25H蛋白的缀合可以通过使马来酰亚胺活化的Pfs25H与OMPC内的硫醇化外膜蛋白反应来实现(对于一般参考文献，参见例如WO2006/124712)，如方案1中所示。

即使该过程可以代表有效的合成途径，所考虑的囊泡可能难以以纯的形式获得，并且它们通常经由费力的过程收集。而且，与选择的抗原的连接需要合适的囊泡蛋白的存在和活化，因此鉴于在囊泡分离期间使用去污剂或化学品(其可改变表面蛋白组成)，提出了额外的挑战。因此，仍然需要提供可用作免疫原性化合物的新缀合物，其克服了现有技术的问题，并且可通过简单且方便的程序实现。

本申请人现已发现，当nOMV经由糖部分与选择的抗原连接时，因此获得的缀合物被赋予显著的免疫原性，并且可通过可靠且方便的方法获得，如下文更详细描述。

发明概述

在第一个方面，本发明涉及免疫原性nOMV-抗原缀合物，其包含通过无去污剂方法获得的天然、外膜囊泡(nOMV)，其至少具有与至少外来选择的抗原连接的天然表面糖部分。

在一个进一步方面，本发明涉及用于制备所述缀合物的方法，其包括以下步骤：

i) 活化至少一个nOMV糖部分，其通常与nOMV表面键合，和

ii) 将因此获得的活化糖与至少一个选择的抗原连接。

根据一个优选实施方案，nOMV-表面键合糖通过氧化活化，且然后与选择的抗原连接，更优选在还原胺化条件下。

在一个额外方面，本发明还是指上述缀合物，其用作药物，特别是作为免疫原性化合物，或用于制备免疫原性组合物或疫苗。

仍在一个进一步方面，本发明涉及免疫原性组合物或疫苗，其包含上述缀合物和至少一种药学上可接受的载体或佐剂；以及涉及用于产生脊椎动物中的免疫应答的方法，其包括施用所述组合物或疫苗。

在一个进一步方面，本发明还是指nOMV用于制备免疫原性缀合物的用途。

附图简述

图1显示索氏志贺氏菌（S. sonnei）的-OAg结构。