[发明专利]用于评价测试物质的免疫原性的方法

说明书

本发明发现，通过使用在已被测试物质刺激的T细胞群体(优选为CD4⁺T细胞群体)中的在IL‑2分泌初期期间的时间点(优选为通过测试物质刺激之后24小时～72小时)的IL‑2分泌细胞的比例作为测试物质的免疫原性的指标，可以在短时间内评价测试物质的免疫原性。

技术领域

本发明涉及用于评价免疫原性的方法，其特征在于在IL-2分泌细胞中检测IL-2的时间和方式。进一步地，本发明涉及用于筛选药物候选物质的方法，其特征在于评价测试物质的免疫原性。

背景技术

今日，许多具有复杂结构的药物如蛋白质在市场上是可获得的。在人体中异物进入体内引起免疫应答，在药物的领域中也是，在免疫应答中，源自蛋白质的活性成分被识别为外来蛋白质，这种药物作为抗原的作用可能导致抗药物抗体(ADA)的产生。ADA的产生可能具有不利的影响例如药物的治疗效果降低，在一些情况下，可诱发可以危及生命的免疫应答。

因此，在含有源自蛋白质的活性成分的药物的开发中，需要从开发的较早阶段评价大量测试物质的免疫原性。因此，已经对通过筛选用于选择较低免疫原性的测试物质作为候选物质的方法进行了研究。已知的手段为如下的测定方法，其中用测试物质刺激源自人组织的细胞，并使用通过免疫应答诱导的T细胞的增殖或在细胞增殖活跃时产生细胞因子如IL-2的细胞的数量作为指标来评价所述物质(例如：参见专利文献1及非专利文献1)。

关于T细胞的活化，已经报道了IL-2产生及IL-2受体α(CD25)表达的作用(例如，参见专非专利文献2)。在该报告中，将用肽刺激的树突细胞与T细胞进行共培养，其中所述肽源自已知具有非常强免疫原性的麦芽糖结合蛋白质(MBP)，所述共培养导致IL-2产生的诱导及T细胞增殖；然而，在细胞不进行共培养或在共培养前将抗IL-2受体α(CD25)抗体添加至树突细胞的情况下，即使用肽进行刺激，也几乎检测不到IL-2产生或细胞增殖。也有报道称，用如蛋白质制剂(例如，抗体制剂)那样的免疫原性更低的物质刺激，响应的T细胞非常少(非专利文献3、4)。实际上，已经报道了在活性T细胞增殖前的阶段，有很少的供体响应蛋白质制剂的刺激，就对于该刺激进行应答的特异性T细胞的增殖程度、表现为伴随细胞增殖而产生细胞因子的供体的频率而言，因用于进行刺激的蛋白质制剂而不同(非专利文献1)。因此，由相对于测试物质的免疫应答诱导的T细胞的增殖、当细胞增殖活跃时细胞因子的产生已作为用于评价测试物质的免疫原性的指标受到关注。

本说明书中引用的参考文献如下列出。这些文献中记载的内容通过参考全部并入本说明书。需要说明的是，这并不意味着将这些文献中的任一个作为相对于本说明书的现有技术。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特表2009-528044号公报

非专利文献

非专利文献1：PLoS One.2016 Aug 5；11(8):e0159328.

非专利文献2：Nat Med.2011 May；17(5):604-609.

非专利文献3：FASEB J.2011 Jun；25(6):2040-2048.

非专利文献4：Clin Immunol.2013 Dec；149(3):534-555.

发明概述

[本发明要解决的问题]

在常规的方法中，其中T细胞的免疫应答用于评价测试物质的免疫原性或对测试物质筛选药物候选物质，所述评价或筛选是在T细胞活跃增殖时(在测试物质的存在下，培养开始之后5～7天或以后)进行的。因此，需花费一定时间或更久的时间，以使得T细胞的增殖可在蛋白质水平检测。因此，从效率方面来看，所述常规方法作为用于选择适于药物的候选物质的工艺是不够的。本发明的目的是，在测试物质的存在下，在培养开始之后短时间内实现免疫原性的评价。