[发明专利]用于激活STING途径的基因佐剂表达的病毒载体构建体

说明书

本发明提供了病毒载体，其用作基因免疫治疗剂，所述基因免疫治疗剂包括预防性和治疗性疫苗以及增强细胞免疫应答的组合物。该载体特别适用于治疗或预防癌症和感染性疾病。该载体包括编码一种或多种抗原和一佐剂的慢病毒载体，并且任选地可以编码一种或多种可溶性检查点抑制剂分子。所述佐剂是包括来自爱泼斯坦‑巴尔病毒的潜伏膜蛋白1(LMP1)的融合蛋白，其中胞质内结构域已经被能够激活STING途径的人IPS1或其变体取代。该载体编码的序列经过密码子优化以用于人类表达。

背景技术

基于抗体引发的免疫应答诱导的规范化疫苗策略已能够根除或接近根除许多先前致命的感染性疾病，例如天花、脊髓灰质炎和破伤风。然而，这些经典的人类疫苗对于其他感染性疾病(如HIV和肝炎)以及非传染性疾病(如癌症)的使用效果不佳或不安全。

旨在诱导细胞免疫应答的新一代免疫治疗产品可以通过识别和杀死癌细胞和感染细胞而非病原体本身来克服传统疫苗的局限性。核酸疫苗，特别是病毒载体，已显示出临床转化的巨大潜力。

癌细胞和许多感染因子都有逃避免疫系统的方法，这使得制造有效的疫苗变得困难。经典的疫苗通常需要例如铝盐的佐剂，以获得最佳的效果，但常规佐剂通常对增强细胞免疫应答的作用较弱。已经提出了一些策略来改善由病毒载体引发的细胞免疫应答的质量和量级。已经开发了一类新的基因佐剂以改善基于载体的免疫疗法诱导的细胞免疫应答。基因佐剂由编码免疫调节分子的DNA序列组成。

Stone等人(WO2014/039961)公开了基因佐剂的用途，其诱导干扰素α和β的分泌，从而诱导干扰素刺激的基因的表达。在该方法中，核酸疫苗任选地除了编码标记蛋白或抗原的转基因外，还编码融合蛋白，所述融合蛋白包括LMP1蛋白的跨膜部分，其中胞质内结构域已被免疫效应子或衔接蛋白如IPS1蛋白质所取代。IFN-β启动刺激因子(IPS1，也称为MAVS，VISA或Cardif)的激活通过STING(干扰素基因的刺激因子)途径产生有效的T细胞应答。当在细胞中表达时，LMP1的跨膜结构域自发地形成簇，其允许IPS1聚集成胞质内簇，激活STING途径。与全长鼠IPS1融合的LMP1的跨膜结构域已显示在小鼠巨噬细胞中能够诱导IFN-α、IFN-β和IL-6的分泌，并且还诱导成熟标记物(CD40和CCR7)和活化标记物(CD80和CD86)的表达。

需要自佐剂疫苗(self-adjuvanting vaccine)来诱导强烈细胞免疫应答，所述强烈的细胞免疫应答是打破在诸如癌症、HIV和其他无药物可治的适应症中观察到的免疫耐受所必须的。

发明概述

本发明的技术提供了编码基因佐剂的病毒载体，用于改善免疫应答，特别是改善细胞介导的免疫应答，例如针对癌症或感染的免疫应答，并且提供了使用该病毒载体的方法。已经优化了本发明技术的抗原和佐剂构建体以用于人类受试者。

该技术的一个方面是病毒载体，其包括(i)一种或多种转基因，其编码一种或多种标记蛋白、抗原、表位或其组合，和(ii)一种转基因，其编码包括爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein Barr)的潜伏膜蛋白1(LMP1)的跨膜部分的融合蛋白，所述LMP1的胞质内结构域已被能够激活STING途径的人IPS1或其变体所取代。在优选的实施方案中，病毒载体是慢病毒载体。在一些实施方案中，载体包括功能性的慢病毒整合酶蛋白，并因此可以整合到其转导的细胞的基因组中。

抗原可以是肿瘤抗原、病毒抗原或微生物抗原。该载体编码多种抗原或选定的一种或多种抗原的表位。在某些实施方案中，至少一种抗原选自由NY-ESO-1、间皮素、PSA、MART-1、MART-2、Gp100、酪氨酸酶、p53、ras、MUC1、SAP-1、存活素、CEA、Ep-CAM、Her2、BRCA1/2、gag、逆转录酶、tat、环子孢子蛋白、HCV非结构蛋白、血凝素及其组合组成的组。在某些实施方案中，载体进一步编码至少一种免疫检查点抑制剂分子，例如抗CTLA-4分子、PD-1阻断剂、PDL1阻断剂或其组合。