[发明专利]围产期组织衍生的间充质干细胞：其制备方法和用途

说明书

本发明公开了胎盘组织衍生的CD106^高CD151+巢蛋白+间充质干细胞(MSC)的制备方法。在第一方面，本发明涉及以工业规模制备这些细胞的特定方法和由此产生的细胞群。在第二方面，本发明涉及通过所述特定方法获得的细胞培养物，其含有表达血管细胞粘附分子1(VCAM‑1)标记物的胎盘CD106^高CD151+巢蛋白+MSC。本申请显示所述胎盘CD106^高CD151+巢蛋白+MSC能够在体外和体内诱导血管生成。本文呈现的结果还显示，将所述胎盘CD106^高CD151+巢蛋白+MSC施用至患有缺血性疾病或循环系统病症的个体，导致所述疾病或病症的一种或多种症状可检测的改善。因此，在第三方面，本发明涉及胎盘CD106^高CD151+巢蛋白+MSC，其用作治疗患有缺血性疾病、循环系统病症、免疫疾病、器官损伤或器官功能衰竭的受试者的药物。

背景技术

已知间充质干细胞(MSC)可用于再生医学和组织工程。在成人中，骨髓、脂肪组织、牙髓和经血是MSC的主要来源。它们也可以通过在补充FCS的DMEM中将胎盘细胞或脐带细胞培养3-4周来获得([12]、[13]、[14])。

MSC具有中胚层、外胚层和内胚层分化潜能。MSC还具有免疫抑制特性。MSC抑制或阻止树突细胞的成熟和T细胞、B细胞和NK细胞的增殖。它们的免疫调节作用由它们分泌的细胞因子和趋化因子介导。几个小组已经证明胎盘组织内的MSC在体外和体内显示出多谱系发育可塑性。胎盘组织(包括脐带、脐带血、胎盘、绒毛膜、羊膜和羊膜液)衍生的MSC显示出CD29、CD44、CD73、CD90和CD105的阳性表达，造血表面标记物CD11b、CD19、CD34和CD45的阴性表达，以及内皮表面标记物CD31的阴性表达。此外，胎盘组织衍生的MSC能够在适当的条件下(例如，一个完整的培养基中)转分化为所有三个胚层的细胞。

围产期组织衍生的MSC也被证明具有广泛的免疫调节能力，能够影响适应性和先天性免疫应答。这些MSC以非MHC限制性方式在体外和体内抑制免疫细胞增殖和成熟并抑制免疫反应。因此，这些MSC被认为是低免疫原性的，显示低表达水平的I类HLA，没有II类HLA表达，并且没有共刺激分子(包括CD40、CD80和CD86)的表达。基本上，这些MSC可以对先天性免疫系统和适应性免疫系统的细胞发挥广泛的免疫调节作用。离体扩增的胎盘MSC也被证明可以抑制广泛的免疫细胞的活性，包括T细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、树突细胞(DC)、B细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞等。

根据许多临床试验报告，人围产期组织衍生的MSC也是安全的。评估了输注脐带衍生的MSC(UC-MSC)对乙型肝炎病毒(HBV)感染相关的慢加急性肝衰竭(ACLF)患者的安全性和初始有效性。这些结果表明MSC输注在临床上是安全的，并且可以作为HBV相关ACLF患者的新型治疗方法[1]。还评估了人UC-MSC在治疗类风湿性关节炎(RA)中的安全性和有效性。这些结果表明在输注期间或之后没有观察到严重的副作用。此外，根据28个关节的疾病活动度评分[2]，MSC的治疗诱导了疾病的显著缓解。科学家们评估了短期和5年随访期间急性心肌梗死(AMI)后不久9例患者心肌内注射MSC的安全性和可行性[3]。这些结果表明，AMI后不久患者心肌内注射MSC是可行的，并且可以安全地进行为期5年的随访。一项确定MSC在严重肢体缺血患者中的安全性的前瞻性双盲随机安慰剂对照多中心研究显示，当肌内注射200万细胞/kg体重的剂量时，MSC也是安全的[4]。在任何MSC植入部位均未检测到赘生性并发症。Hongye Fan等人([15])表明在DSS诱导的小鼠结肠炎中，移植IL1β引发的MSC具有增强的治疗有效性，这取决于它们增加的免疫抑制能力和增强的迁移能力。WO2014/093948也公开了纯化的MSC的治疗价值。