[发明专利]以高收率分离RNA的方法

权利要求书

1.一种从样品中分离核酸的无苯酚方法，所述方法包括以下步骤：

a)向样品添加沉淀缓冲液以制备酸性沉淀混合物，

其中所述沉淀缓冲液包含金属阳离子沉淀剂和缓冲剂，pH值为4.0或更低，并且不包含选自非质子极性溶剂和质子溶剂的有机溶剂，并且

其中所述酸性沉淀混合物包含浓度小于200mM的金属阳离子沉淀剂，

并沉淀蛋白质；

b)将沉淀物与上清液分离，其中所述上清液包含长度小于200nt的小RNA和长度为至少1000nt的大RNA；以及

c)从所述上清液中分离核酸。

2.权利要求1的方法，其中所述金属阳离子沉淀剂选自Zn²⁺、Cu²⁺和Al³⁺，优选Zn²⁺。

3.权利要求1或2的方法，其具有以下特征中的一个或多个：

i)步骤a)中提供的沉淀混合物包含浓度为175mM或更低、170mM或更低、165mM或更低、160mM或更低、155mM或更低、150mM或更低、145mM或更低或者140mM或更低的所述金属阳离子沉淀剂；

ii)步骤a)中提供的沉淀混合物包含浓度为至少50mM、至少60mM、至少65mM、至少70mM、至少75mM、至少80mM、至少85mM、至少90mM、至少95mM或至少100mM的所述金属阳离子沉淀剂；

iii)步骤a)中提供的沉淀混合物包含浓度选自50mM至175mM、60mM至170mM、65mM至165mM、70mM至160mM、75mM至155mM、80mM至150mM、85mM至145mM、和90mM至140mM的所述金属阳离子沉淀剂；和/或

iv)所述沉淀缓冲液包含所述金属阳离子沉淀剂的溶解盐，优选ZnCl₂。

4.权利要求1至3中一项或多项的方法，其中所述沉淀缓冲液包含浓度选自250mM至3M、500mM至2.8M、0.75M至2.7M、1M至2.6M、1.25M至2.5M、1.5M至2.25M和1.7M至2M的所述金属阳离子沉淀剂。

5.权利要求1至4中一项或多项的方法，其中所述沉淀缓冲液是水溶液，所述水溶液的pH值选自2.5至4、2.75至4.0、2.8至4.0、3.0至4.0、3.1至3.9、3.2至3.9、3.3至3.9、3.4至3.9、3.5至3.9和3.5至3.8。

6.权利要求1至4中一项或多项的方法，其中所述沉淀缓冲液是水溶液，所述水溶液

(i)包含浓度在1M至3M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.0至4.0的范围内，或

(ii)包含浓度在1.25M至2.5M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.3至3.9的范围内，或

(iii)包含浓度在1.5M至2.25M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.4至3.9的范围内，或

(iv)包含浓度在1M至3M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.5至3.9的范围内，或

(v)包含浓度在1.7M至2.1M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.0至4.0的范围内，或

(vi)包含浓度在1.7M至2.1M范围内的所述金属阳离子沉淀剂并且pH值在3.5至3.9的范围内。

7.权利要求1至6中一项或多项的方法，其中待分离的核酸是RNA并且其中步骤c)包括从所述上清液中分离至少小RNA和/或大RNA。

8.权利要求7的方法，其中在步骤c)中使用核酸结合固相来分离RNA并且其中使用至少一种醇和/或至少一种离液盐来建立RNA结合条件。