[发明专利]一种新型甲基化建库试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种甲基化建库试剂盒，至少包括：重亚硫酸盐转化试剂、黏性末端接头、连接酶、DNA延伸试剂、以及DNA扩增试剂。

2.根据权利要求1所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括细胞裂解液或基因组DNA抽提试剂，所述细胞裂解液用于对单细胞样本裂解，获得单细胞样本的基因组DNA。

3.根据权利要求1所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括双链接头。

4.根据权利要求3所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，

所述重亚硫酸盐转化试剂用于对样本基因组DNA进行重亚硫酸盐转化；

所述黏性末端接头用于连接到重亚硫酸盐转化后的样本基因组DNA变性成的单链DNA上，获得一端带有接头的单链DNA；

所述连接酶用于连接黏性末端接头与所述单链DNA；

所述DNA延伸试剂用于对所述一端带有接头的单链DNA进行延伸，形成一端带有接头的双链DNA；

所述双链接头用于连接到所述一端带有接头的双链DNA的另一端，形成双端带有接头的双链DNA；

所述DNA扩增试剂用于对所述双端带有接头的双链DNA进行扩增，获得甲基化测序文库。

5.根据权利要求1所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头为带有黏性末端的双链接头，所述黏性末端接头的一端为第一黏性末端，所述第一黏性末端至少包括随机序列。

6.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头的另一端为平末端或第二黏性末端。

7.根据权利要求6所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，当所述黏性末端接头的另一端为第二黏性末端时，还包括以下特征中的任一项或多项：(1)所述第二黏性末端为任意序列或A/T/C/G寡核苷酸的重复序列，优选的为重复序列；(2)所述第二黏性末端的长度为2-10nt，优选为2-5nt。

8.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述第一黏性末端包括随机序列及特殊序列。

9.根据权利要求8所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述特殊序列为序列确定的序列。

10.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的长度为10-70nt，优选为10-30nt，更优选为10-25nt。

11.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的退火温度为10-100℃，优选为20-80℃，更优选为30-60℃。

12.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：(1)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的5’端进行磷酸化修饰；(2)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的5’端进行间臂(spacer)修饰；(3)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的5’端进行氨基修饰；(4)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的5’端采用甲基化修饰的重复A/T/C/G序列；(5)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的3’端进行生物素化修饰；(6)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的3’端进行间臂(spacer)修饰；(7)所述黏性末端接头中，带有第一黏性末端的单链的3’端进行氨基修饰。

13.根据权利要求5所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头中，不带有第一黏性末端的那条单链称为另一条单链。

14.根据权利要求13所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头中，另一条单链的长度为10-70nt，优选为10-30nt，更优选为10-25nt。

15.根据权利要求13所述的甲基化建库试剂盒，其特征在于，所述黏性末端接头中，另一条单链的退火温度为10-100℃，优选为20-80℃，更优选为30-60℃。