[发明专利]一种检测结直肠癌易感基因突变的试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一组检测结直肠癌易感基因突变的引物，其特征在于，包含通用性引物和特异性引物。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述的通用性引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述的特异性引物包括：

用于扩增PIK3CA基因突变位点的特异性引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3～6所示；

用于扩增BRAF基因突变位点的特异性引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示；

用于扩增KRAS基因突变位点的特异性引物核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

4.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述的特异性引物可以被硫代修饰、2-氟代核糖核酸修饰、2'-O-甲基核糖核酸修饰、5-甲基脱氧胞嘧啶修饰、脱氧次黄嘌呤修饰、2-氨基嘌呤修饰、5-溴-脱氧尿嘧啶修饰、反向dT修饰、双脱氧胞苷修饰、间臂修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰、生物素修饰、锁核苷酸修饰中的任意一种方式修饰，也可以是多种方式同时修饰。

5.一种检测结直肠癌易感基因突变的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-4中任一项所述的引物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR混合反应液、纯化磁珠和阳性对照。

7.根据权利要求5-6中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR混合反应液包括DNA聚合酶、dNTPs和2×PCR缓冲液。

8.一种非疾病诊断目的的检测结直肠癌易感基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：提取待测样本的基因组DNA，特异性引物与模板基因组DNA序列结合、通用引物扩增待测样本目标区域，磁珠纯化文库，对得到的文库进行高通量测序并分析结直肠癌易感基因的突变。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述待测样品为组织切片、石蜡包埋组织和血浆中的一种或多种。