[发明专利]环状RNA‑DGKB在垂体腺瘤生物标记中应用及表达

权利要求书

1.环状RNA-DGKB在垂体腺瘤生物标记中应用，其特征在于：circRNA-DGKB长401bp，位于人类的第7条染色体上14647058到14712652，DGKB是该环状RNA的覆盖基因，所述的RNA-DGKB碱基序列如SEQIDNO：1所示。

2.如权利要求1所述的应用，包括检测来自所述对象的垂体腺瘤组织样本中circRNA-DGKB的量，其中较高量的circRNA-DGKB为所述对象垂体腺瘤侵袭性强，并与所述对象预后不良可能性增加有关。

3.环状RNA-DGKB在垂体腺瘤生物标记中的表达，其特征在于：具体的表达方法包含以下步骤：

步骤一、侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织RNA提取；

步骤二、总RNA反转录cDNA；

步骤三、将cDNA进行定时定量PCR检测，反应结束后检测样品中circRNA-DGKB的PCR识别序列，然后与PCR产物序列结果进行对比可知circRNA-DGKB在垂体腺瘤组织中进行表达。

4.根据权利要求3的表达方法，其特征在于：所述的步骤一中侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织RNA提取方法是相同的，具体提取方法为：称取2克组织材料，加入250微升RNAiso Plus，手持电动器研磨后，转移至1.5毫升RNase-free的离心管中，12000转4℃离心10分钟，去上清200微升加入1.5毫升RNase-free的离心管中，加入1毫升RNAiso Plus新混匀后室温静置5分钟，加入200微升的氯仿，充分混匀后，室温静置3分钟，12000转4℃离心15分钟，取上清250ul，加入500微升异丙醇混匀后室温静置10分钟，12000转4℃离心10分钟。弃掉上清，加入75％乙醇，颠倒混匀后，7500转4℃离心5分钟，弃掉上清，室温静置5分钟，加入15-20微升Nuclease-Free water溶解，Nanodrop测算所得液体的OD值及浓度。

5.根据权利要求3的表达方法，其特征在于：所述的步骤二中总RNA反转录cDNA的方法为：按照反转录试剂盒PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser说明，加入1微克RNA进行基因组DNA的去除，具体加入DNA酶、反应缓冲液及Nuclease-Free水补齐10微升反应体系，PCR仪42℃孵育2分钟。而后进行反转录，具体加入反转录所需的随机引物，缓冲液、反转录酶及Nuclease-Free水补齐20微升反应体系，PCR仪37℃孵育15分钟，85℃孵育30秒，4℃保温，将反转录产物1∶10稀释，在冰上制备qPCR混合物。

6.根据权利要求3的表达方法，其特征在于所述的步骤三中将cDNA进行定时定量PCR检测反应条件如下：首先95℃下预变性30秒，然后95℃变性5秒，56℃退火30秒，72℃延伸30秒，40个循环，热融解阶段95℃下变性60秒，56℃下热融解30秒，95℃热融解30秒。