[发明专利]环状RNA‑DGKB在垂体腺瘤生物标记中应用及表达

说明书

技术领域

本发明涉及环状RNA-DGKB(circRNA-DGKB)在垂体腺瘤生物标记中应用及表达，具体为天然核糖核苷酸的用途技术领域。

背景技术

垂体腺瘤(简称垂体瘤)是人类最常见的颅内肿瘤之一，约占颅内肿瘤的10％-15％。垂体瘤在组织学上属于良性肿瘤，但有些垂体瘤呈侵袭性生长，包绕或侵犯周围组织结构，该部分肿瘤手术难以彻底切除，是肿瘤复发的主要原因之一。根据垂体瘤的生物学行为可分为非侵袭性垂体瘤、侵袭性垂体瘤和垂体癌。侵袭性垂体瘤介于非侵袭性垂体瘤和垂体癌之间，其组织学形态属于良性，生物学特征却似恶性。侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的临床表现、预后均明显不同。侵袭性垂体腺瘤的坏死、卒中、囊变发生率明显高于非侵袭性垂体腺瘤。侵袭性生长使得外科手术难以做到全切肿瘤，而常用药物溴隐停、生长抑素对这类肿瘤的疗效较差；侵袭性生长同样限制了其对放疗的敏感性，且鞍区放疗容易导致正常垂体、下丘脑及视神经等重要结构的损伤。这些因素导致侵袭性垂体腺瘤术后复发率高，肿瘤残余组织增长快。显而易见，对侵袭性垂体瘤的治疗是神经外科领域和肿瘤治疗领域面临的巨大挑战。因此，寻找与垂体腺瘤侵袭性相关的分子标记对于及时治疗和改善预后至关重要。

环状RNA是一类能够闭合成环的长链非编码RNA，在病毒、植物，古细菌中已经发现大量环状RNA的存在。近年来，Norman E Sharpless等研究组通过高通量技术与生物信息学分析推测在哺乳类动物细胞中存在大量内源性环状RNAs，并通过Northern blot、二维凝胶电泳和反向引物PCR等生化实验手段得到了证实。部分研究成果揭示了环状RNAs可以通过消耗剪切小体、结合RNA聚合酶II以及吸附miRNA等方式，参与调控细胞生物行为中核心基因的表达。研究表明，环状RNAs在多种肿瘤细胞中表达异常，提示其可能与肿瘤的发生发展密切相关。

发明内容

本发明的目的在于提供环状RNA-DGKB在垂体腺瘤生物标记中应用及表达。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种环状RNA-DGKB(circRNA-DGKB)在垂体腺瘤生物标记中应用，circRNA-DGKB长401bp，位于人类的第7条染色体上14647058到14712652，DGKB是该环状RNA的覆盖基因。

所述应用包括检测来自所述对象的垂体腺瘤组织样本中circRNA-DGKB的量，其中较高量的circRNA-DGKB为所述对象垂体腺瘤侵袭性强，并与所述对象预后不良可能性增加有关。

本发明还提供环状RNA-DGKB在垂体腺瘤生物标记中表达，所述的表达方法包含以下步骤：

步骤一、侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织RNA提取；

步骤二、总RNA反转录cDNA；

步骤三、将cDNA进行定时定量PCR检测，反应结束后检测样品中circRNA-DGKB的PCR识别序列，然后与PCR产物序列结果进行对比可知circRNA-DGKB在垂体腺瘤组织中进行表达。

进一步优选，所述的步骤一中侵袭性和非侵袭性垂体腺瘤组织RNA提取方法是相同的，具体提取方法为：称取2克组织材料，加入250微升RNAiso Plus，手持电动器研磨后，转移至1.5毫升RNase-free的离心管中，12000转4℃离心10分钟，去上清200微升加入1.5毫升RNase-free的离心管中，加入1毫升RNAiso Plus新混匀后室温静置5分钟，加入200微升的氯仿，充分混匀后，室温静置3分钟，12000转4℃离心15分钟，取上清250ul，加入500微升异丙醇混匀后室温静置10分钟，12000转4℃离心10分钟。弃掉上清，加入75％乙醇，颠倒混匀后，7500转4℃离心5分钟，弃掉上清，室温静置5分钟，加入15-20微升Nuclease-Free water溶解。Nanodrop测算所得液体的0D值及浓度。

进一步优选，所述的步骤二中总RNA反转录cDNA的方法为：按照反转录试剂盒PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser说明，加入1微克RNA进行基因组DNA的去除，具体加入DNA酶、反应缓冲液及Nuclease-Free水补齐10微升反应体系，PCR仪42℃孵育2分钟。而后进行反转录，具体加入反转录所需的随机引物，缓冲液、反转录酶及Nuclease-Free水补齐20微升反应体系，PCR仪37℃孵育15分钟，85℃孵育30秒，4℃保温，将反转录产物1：10稀释，在冰上制备qPCR混合物。