[发明专利]一种编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法及应用在审
| 申请号： | 201810009858.2 | 申请日： | 2018-01-04 |
| 公开（公告）号： | CN108085291A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 余美伦;孟庆雪;秦香芹;李影;韩伟丽;何佳;王春东;苑玉凤;王宁;唐世梅 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨瀚邦医疗科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 李双艳 |
| 地址： | 150000 黑龙江省*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 溶菌酶释放蛋白 基因载体 遗传稳定性 检测 宿主菌 质粒 应用 培养含有编码 生物工程领域 保藏 传代培养 代数 多代 菌液 取样 复苏 参考 研究 支撑 | ||
1.一种编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，包括：
于液体培养基中培养含有编码溶菌酶释放蛋白的基因载体质粒的宿主菌菌液；
连续传代培养所述宿主菌菌液；
间隔取样所述传代培养的所述宿主菌菌液并进行遗传稳定性检测。
2.根据权利要求1所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述宿主菌菌液的接种量为所述液体培养基的体积的1％-6％。
3.根据权利要求1所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述宿主菌菌液为甘油菌液。
4.根据权利要求3所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述甘油菌液的制备包括：
将含编码溶菌酶释放蛋白的基因的载体质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中，通过鉴定引物检测鉴定，得到阳性的重组大肠杆菌；
培养所述重组大肠杆菌，并添加甘油制成甘油菌种保藏。
5.根据权利要求4所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述大肠杆菌感受态细胞为TOP10细胞、DH5α细胞和BL21(DE3)细胞中的一种。
6.根据权利要求4所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述含编码溶菌酶释放蛋白的基因的载体质粒与所述大肠杆菌感受态细胞的体积比为1-4:100。
7.根据权利要求6所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述含编码溶菌酶释放蛋白的基因的载体质粒的浓度为1.7-4.8ng/μL。
8.根据权利要求4所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述转化的方法为：混合所述含编码溶菌酶释放蛋白的基因的载体质粒和所述大肠杆菌感受态细胞，冰上放置25-37min；热激35-55s，冰上放置2-3min。
9.根据权利要求4所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法，其特征在于，所述检测鉴定通过PCR反应实现，所述PCR反应的退火温度为52-58℃。
10.如权利要求1-9任一项所述的编码溶菌酶释放蛋白的基因载体遗传稳定性的检测方法在编码溶菌酶释放蛋白的基因载体培养中的应用。
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