[发明专利]一种犬降钙素原检测试剂盒和该检测试剂盒中荧光试剂的制备方法

权利要求书

1.一种犬降钙素原检测试剂盒，包括顶部敞口的盒体（1），其特征是所述盒体的敞口上扣装有扣罩（2），扣罩（2）内安装试纸板（3）且扣罩（2）倾斜设置，扣罩（2）的低端通过弹片（4）连接在盒体（1）上、扣罩（2）的高端设置反应键（5），扣罩（2）上在靠近反应键（5）的位置上开设加样孔（6）；所述试纸板（3）包括PVC底衬板（7）、硝酸纤维素膜（8）、吸水垫（9）和样品处理垫（14），硝酸纤维素膜（8）、吸水垫（9）和样品处理垫（14）均粘贴在PVC底衬板（7）上且硝酸纤维素膜（8）位于中部、样品处理垫（14）和吸水垫（9）分别搭接在硝酸纤维素膜（8）的高端和低端，硝酸纤维素膜（8）的中部平行设有一条包被有抗犬降钙素原多抗的检测线（L-T）和一条包被有羊抗鼠IgG二抗的质控线（L-C），扣罩（2）上开设有正对硝酸纤维素膜（8）中部的观察窗（13）；盒体（1）的内部设置有试剂槽（10），试剂槽（10）位于PVC底衬板（7）贴有样品处理垫（14）一端的正下方，试剂槽（10）内盛装有荧光试剂，试剂槽（10）的开口上封装有密封薄膜（11），PVC底衬板（7）的底面上连接有可在反应键按下时将密封薄膜（11）刺破的钩刺（12）。

2.根据权利要求1所述的犬降钙素原检测试剂盒，其特征是所述样品处理垫（10）包括经处理液处理后的全血滤膜和经红细胞单抗处理液处理后的玻璃纤维膜，玻璃纤维膜设置于外层，全血滤膜设置于内层；所述玻璃纤维膜和全血滤膜于室温相对湿度不高于30%的条件下密封干燥处理。

3.根据权利要求2所述的犬降钙素原检测试剂盒，其特征是所述处理液为含有0.2-1%%Tween-20、0.1-2%BSA和0.5-1%阻断剂的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液，所述红细胞单抗处理液为含有0.2-1%%Tween-20、0.1-2%BSA和0.5-3mg/mL抗-Hb单抗的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液。

4.根据权利要求1所述的犬降钙素原检测试剂盒，其特征是所述检测线（L-T）和质控线（L-C）由喷膜仪以1-2uL/cm喷速、0.7cm间距在硝酸纤维素膜上平行划线形成，喷膜仪用到的两种抗体溶液分别为将抗犬降钙素原多抗用0.02M、pH7.0的Tri-Cl缓冲液配制成1-2mg/mL的抗体溶液和将羊抗鼠IgG二抗用0.02M、pH7.0的Tri-Cl缓冲液配制成1-2mg/mL的抗体溶液，喷线后的硝酸纤维素膜于室温相对湿度不高于30%的条件下干燥、密封保存。

5.一种如权利要求1所述犬降钙素原检测试剂盒中荧光试剂的制备方法，其特征是包括如下步骤：

步骤1）取荧光微球经4000rpm 离心30min，收集沉淀，用0.01M、pH5.0的硼酸盐缓冲液调整微球浓度为=0.2，分别加入10mg/mL1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺200uL和30mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺80uL，震荡混匀，室温活化45min，得到初级产品；

步骤2）将初级产品经4000rpm离心30min，沉淀用0.05M、pH9.5的CBS溶液重悬，调整微球浓度为为0.2，同时将犬降钙素原单克隆抗体用pH9.5的0.025M碳酸盐缓冲液透析过夜，按600-800ug/mg比例向荧光微球重悬液中加入犬降钙素原单克隆抗体，4℃搅拌过夜，加入NaBH3CN至终浓度5mM，反应1.5h得到中级产品；

步骤3）在中级产品中加入等体积封闭液37℃封闭1h，用0.1M、pH7.8的Tri-Cl缓冲液洗涤3次，每次20min，最后用100uL样品缓冲液重悬制荧光微球标记的犬降钙素原单克隆抗体荧光试剂，4℃保存备用。

6.根据权利要求5所述的一种犬降钙素原快速定量检测试剂盒，其特征是所述封闭液包括2-5%BSA的0.1M、pH70-8.0的Tri-Cl缓冲液，所述样品缓冲液包括1-2%BSA、0.1-0.5%PEG2000、2-5%海藻糖的0.02M、pH7.0-8.0的Tri-Cl缓冲液。