[发明专利]一种犬降钙素原检测试剂盒和该检测试剂盒中荧光试剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种犬降钙素原检测试剂盒和该检测试剂盒中荧光试剂的制备方法，检测试剂盒包括内置反应模块的扣罩和内置试剂模块的盒体，所述反应模块包括加样孔、反应键、反应区、试纸板和钩刺；所述试剂模块包括试剂槽，所述试剂槽内设有荧光试剂。本发明可用于血清、血浆、末梢血或静脉血中CPCT快速定量分析，具有灵敏度高、特异性强、重复性好等优势；具有良好的稳定性、线性和准确性，可快速、简便、定量的测定被检测物的含量，为细菌性感染的诊断、鉴别诊断、治疗疗效监测及愈后评估提供支持，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种犬降钙素原快速定量检测试剂盒。

背景技术

犬降钙素原(Canine Procalcitonin，CPCT)是无激素活性的降钙素前体物质，是犬的一种主要的急性期反应蛋白（Acure phase protein, APP）。来自定位于第11号染色体上( llp15，4)的单拷贝基因，由116个氨基酸组成，分子量为13KD的糖蛋白。PCT由N末端-降钙素-C末端三部分组成，其不会降解为降钙素，不受体内激素水平影响。PCT由神经内细胞（包括甲状腺、肺和胰腺组织细胞）在受到促炎症反应刺激特别是受到细菌引起的刺激后表达，半衰期为25～30小时，是用于检测细菌感染所致炎症反应的较好指标之一。

CPCT是一种能特异性区分细菌感染和其它原因导致的炎症反应的重要标志物，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，其在血浆中的水平升高。在导致全身炎症反应综合征(SIRS)的许多情况下，诸如细菌性感染、胰腺炎、烧死、多发伤，血中PCT的含量异常升高，而CT无明显变化。血中PCT水平与感染及损伤的严重程度呈正相关，且己成为用于脓毒症、严重脓毒症、脓毒休克的诊断和疗效监测的有效指标。临床资料显示，CPCT浓度>0. Ing/mL时说明存在临床相关的细菌感染，需要采用抗生素进行治疗；当CPCT浓度>0. 5ng/mL时，要考虑患者可能有发展成重症败血症或败血症性休克的危险。CPCT反映了全身炎症反应的活跃程度，可以作为一个全身性细菌感染和脓毒症辅助和鉴别诊断的实验室常规指标。影响CPCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。检测病例中CPCT浓度的变化，有利于判断机体细菌感染情况，评判机体健康状况，对临床和基础性研究都有重要意义。

自上世纪80年代以后，免疫学检测技术随着单克隆抗体、人工多肽、基因工程及各种标记技术的成熟而迅速发展，免疫比浊法、速率散射比浊法(INA)、胶乳增强透射比浊法(ITA)与化学发光分析技术逐渐取代传统的免疫沉淀、免疫凝集物，使检测更为快捷，近些年快速检测(POCT)的应用使免疫学操作更为简单、方便。

CPCT的检测方法除了过去使用费时不易自动化的凝胶层分析法和高效液相色谱分析法外，常用的免疫学检测方法有：放射性免疫分析法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析法(GICA)和化学发光免疫分析法(CLIA)等。RIA有很高的检测灵敏度，但由于标记物具有放射性危害，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点，已逐渐退出临床检验领域；ELISA是利用两种双抗体夹心法原理检测血清中CPCT，方法较特异，无交叉反应，但是检测敏感性低，最低限为仅l0ug/L，正常血清中PCT浓度不能检出，且线性范围窄、不易实现全自动化等缺陷；GICA具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低、试剂不稳定、重复性较差、难以进行定量等缺点；CLIA法是在RIAh和ELISA基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势，但现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒多为进口的封闭式全自动化学发光检测系统，需要昂贵的全自动化学发光检测仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。