[发明专利]一种用于检测PDGFRA基因突变的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及一种用于检测PDGFRA基因突变的引物组、试剂盒及方法，属于生物检测技术领域。本发明用于检测PDGFRA基因突变的引物组包括用于检测PDGFRA基因外显子12的PCR扩增引物对、用于检测PDGFRA基因外显子14的PCR扩增引物对和用于检测PDGFRA基因外显子18的PCR扩增引物对。本发明提供了一种新的用于检测PDGFRA基因突变的引物组，其可用于检测PDGFRA基因外显子12、外显子14和外显子18的突变情况；采用该引物组检测PDGFRA基因突变，特异性好、准确度高和灵敏度好，对低突变率的样本也能准确检出。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于检测PDGFRA基因突变的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

PDGFRA基因(血小板源性生长因子)位于人类染色体4q11-q12，属于第Ⅲ类酪氨酸激酶受体。研究表明，PDGFR通路的激活也涉及关键的下游信号通路，包括RAS-MAPK途径/PI3K途径。

胃肠间质瘤(GIST)是较常见的消化道间叶性肿瘤，研究表明，在GIST中PDGFRA基因突变率为5％，PDGFRA突变主要发生在编码活性结构域的18外显子，其次为编码近膜域的12外显子，发生在14外显子的突变极少(<1％)。

目前对PDGFRA基因突变的检测方法主要包括测序法、ARMS和RT-PCR等。ARMS技术是目前国内应用最为广泛的技术，但对样本量要求高；RT-PCR技术成本较低，但检测率较高，容易出现假阳性结果；Sanger测序法是DNA序列分析的经典方法，被认为是检测基因突变的金标准，具有技术和平台成熟、结果准确和全面等优点。但是其检测灵敏度约为15-20％，即突变基因含量要大于15％甚至20％才能被可靠检出。而胃肠间质瘤患者PDGFRA基因突变率较低，现有的Sanger测序法很难将其检测出来。因此，急需提供一种灵敏度高、特异性好的PDGFRA基因突变检测产品和方法，在保证特异性和准确率的同时具有很好的灵敏度，能将低突变率的样本中的PDGFRA基因突变准确检出。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种特异性好、准确度高和灵敏度高的用于检测PDGFRA基因突变的引物组及方法。

与此相应，本发明还提供了含有上述引物组的试剂盒以及上述引物组在制备用于检测PDGFRA基因突变的试剂盒中的应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种用于检测PDGFRA基因突变的引物组，其包括用于检测PDGFRA基因外显子12的PCR扩增引物对、用于检测PDGFRA基因外显子14的PCR扩增引物对和用于检测PDGFRA基因外显子18的PCR扩增引物对；其中，所述用于检测PDGFRA基因外显子12的PCR扩增引物对包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和如SEQ IDNO:2所示的下游引物；所述用于检测PDGFRA基因外显子14的PCR扩增引物对包括如SEQ IDNO:3所示的上游引物和如SEQ ID NO:4所示的下游引物；所述用于检测PDGFRA基因外显子18的PCR扩增引物对包括如SEQ ID NO:5所示的上游引物和如SEQ ID NO:6所示的下游引物。

本发明提供的上述引物组，可用于检测PDGFRA基因外显子12、外显子14和外显子18的突变情况；采用该引物组检测PDGFRA基因突变，特异性好、准确度高。