[发明专利]用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST‑SSR标记

权利要求书

1.用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST-SSR标记，其特征在于：EST-SSR标记的正向引物序列如SEQ ID N0.1所示，EST-SSR标记的反向引物序列如SEQ ID N0.2所示。

2.根据权利要求1所述的用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST-SSR标记，其特征在于：

利用所述EST-SSR标记进行PCR扩增，在番茄砧木品种爱好母本中扩增出一条约126bp的条带，在番茄砧木品种爱好父本中扩增出一条约132bp的条带，而在番茄砧木F1品种爱好中扩增出126/132bp的杂合条带。

3.一种利用权利要求1所述的EST-SSR标记鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）选取番茄砧木F1品种爱好与其母本、父本的种子进行田间种植和管理；

2）利用改良的CTAB法，从待测新鲜植物叶片中提取番茄基因组DNA；

3）以步骤2)制备番茄基因组DNA为模板，利用EST-SSR标记进行PCR扩增；

4）将步骤3）中PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，如果检测的所有扩增产物中都同时含有父母本所对应的条带126/132bp，则该番茄砧木F1品种爱好品种纯度达到了100%。

4.一种根据权利要求3所述的利用权利要求1所述的EST-SSR标记鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的方法，其特征在于：所述改良的CTAB法包括以下步骤：

取新鲜叶片30mg放入2ml的离心管中，加入一个直径4mm的钢珠，盖紧盖子，将其放入液氮中2min，然后利用组织研磨仪磨样；

在磨好的样中加入600µl CTAB，55℃水浴15min；

12000rpm离心5min，吸取500µl上清于干净的1.5ml的离心管中，加入250µl氯仿和异戊醇混合物，充分混匀；氯仿和异戊醇混合物中氯仿和异戊醇的体积比为24：1；

13000rpm离心90s，取350µl上清于另一1.5ml的离心管中，加入已经在-20℃条件下提前预冷的无水乙醇600µl、加入60µl乙酸铵，混匀，放-20℃冰箱1h；

13000rpm离心5min，倒掉上清液，室温放置；

待离心管中无酒精味时，加入100µl ddH₂O溶解DNA。