[发明专利]用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST‑SSR标记在审
申请号: | 201810013749.8 | 申请日: | 2018-01-08 |
公开(公告)号: | CN107904325A | 公开(公告)日: | 2018-04-13 |
发明(设计)人: | 卢霞;阿门;邓志军;司龙亭 | 申请(专利权)人: | 江苏绿港现代农业发展有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
代理公司: | 宿迁市永泰睿博知识产权代理事务所(普通合伙)32264 | 代理人: | 陈臣 |
地址: | 223800 江苏省宿迁*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 鉴定 番茄 砧木 品种 爱好 杂交 种子 纯度 est ssr 标记 | ||
技术领域
本发明涉及一种EST-SSR标记,尤其是一种用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST-SSR标记,属于生物技术领域。
背景技术
番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)栽培面积大,因其产量高、效益好、营养价值丰富,成为大众喜爱的蔬菜品种,在蔬菜生产中占非常重要的地位。近年来设施番茄栽培面积不断扩大,保护地栽培番茄生产效益大大提高,但由于受设施条件所限,轮作困难,重茬栽培导致病虫害侵染严重,尤其是枯萎病、青枯病、根结线虫病等土传病害日益加重。土传病害的发生与连作重茬有密切关系,而保护地栽培的番茄,多为连作栽培,因此土传病害已成为影响番茄生产的主要病害。通过利用多抗砧木嫁接栽培是防治番茄土传病害的一种有效的方法。嫁接苗根系发达,植株矮壮,主茎粗大,可有效防止枯萎病等土传病害的发生,克服连作障碍,减少农药使用,实现无公害生产。
砧木选择作为嫁接的基础工作,是决定嫁接能否成功与效果好坏的关键。优良的砧木品种不仅可提高番茄的抗病性,而且可促进植株对养分的吸收,提高水分利用效率。但不适宜的砧木嫁接后嫁接植株无法生长或生长不良,这样会给生产造成极大损失,特别是后期不亲和损失更严重。因此,选用优良砧木品种是番茄嫁接栽培取得成功的关键。爱好是作为番茄嫁接砧木用的优良一代杂交品种,以其为砧木的嫁接苗生长势强,根系发达,抗逆性强,亲和力高,无限生长。对青枯病、根斑病、黄萎病、枯萎病、线虫病等具有较强抗性。苗期生长快,苗龄短,嫁接栽培坐果早,采收期提前,增产效果显著。
种子纯度是决定蔬菜作物种子质量的关键因素,纯度降低会使蔬菜产品异质性增强,致使收成减少和产品形状不整齐,对生产、贮藏、销售产生巨大影响。番茄作为模式植物被广泛研究应用,其种子繁育过程复杂、品种多、种粒小、品种名和地方俗名混淆使用,直接导致很多同名异物现象。由于有限的亲本资源和杂交品种的不断涌现,使得品种间遗传差异越来越小,传统的形态学田间小区的番茄种子纯度鉴定方法很难区分,且传统方法检测周期长、费时费工、占地面积较大,易受环境影响,不能满足当年生产需要。
在当前种子工作与生产实际中,准确、迅速、简便地鉴定蔬菜品种的真实性及纯度一直是人们关注的热点。近年来,分子生物学的发展使种子纯度鉴定进入到基因水平。分子标记鉴定采用电泳方法检测基因组DNA 结构与组成,通过分析DNA 水平上的差异来检验品种纯度和真实性,其遗传性稳定,多态性高;不受发育阶段、取材部位等环境因素的制约;待检测样品的长期保存性使得追溯性或仲裁性鉴定成为可能,DNA分子标记技术已被广泛用于蔬菜作物品种鉴定与纯度检测中。随着番茄全基因组测序的完成,开发了很多SSR标记,其中基因组SSR具有高多态性,且在基因组分布范围广泛,而EST-SSR是基于表达序列标签开发微卫星的一种新型分子标记,其具有在植株物种间可转移的优点,广泛分布在基因的功能区域。在这里,我们提出了一个EST-SSR标记,其具有将优良的番茄砧木品种爱好进行准确高效鉴定纯度的能力。
发明内容
为了克服传统的番茄杂交种纯度的鉴定周期长、费时费工、占地面积大,易受环境影响等形态学田间小区鉴定方法的不足,本发明提供了一种用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST-SSR标记,这种EST-SSR标记是一个基于DNA水平的,稳定可靠的EST-SSR标记,用于鉴定番茄砧木品种爱好的纯度鉴定。
本发明通过下面的技术方案加以实现:
一种用于鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的EST-SSR标记,EST-SSR标记的正向引物序列如SEQ ID N0.1所示,EST-SSR标记的反向引物序列如SEQ ID N0.2所示。
而且,利用所述EST-SSR标记进行PCR扩增,在番茄砧木品种爱好母本中扩增出一条约126bp的条带,在番茄砧木品种爱好父本中扩增出一条约132bp的条带,而在番茄砧木F1品种爱好中扩增出126/132bp的杂合条带。
而且,利用所述EST-SSR标记鉴定番茄砧木品种爱好杂交种子纯度的方法,包括以下步骤:
1)选取番茄砧木F1品种爱好与其母本、父本的种子进行田间种植和管理;
2)利用改良的CTAB法,从待测新鲜植物叶片中提取番茄基因组DNA;
3)以步骤2)制备番茄基因组DNA为模板,利用EST-SSR标记进行PCR扩增;
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