[发明专利]从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法

权利要求书

1.一种从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，该方法步骤如下：

a、原料处理：取新鲜的成熟十字花科蔬菜种子，加去离子水研磨成浆，然后用重量比为2：1的柠檬酸与Vc的混合物调节pH值为5.5～6.5，于50～60℃密封发酵16～20h，得发酵浆液；

b、乙酸乙酯萃取：于发酵浆液中加入1～1.4倍体积的乙酸乙酯，于摇匀时间25～35min，静置萃取温度20～30℃、时间50～70min下萃取2次，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，回收乙酸乙酯，真空冷冻干燥，得异硫氰酸酯粗提物；

c、纳米膜初步纯化：将上述所得异硫氰酸酯粗提物用去离子水配制成质量浓度为1.5～2.5％的溶液，先采用截留分子量为2000Da的纳米膜进行纳滤分离，并在滤液重为滤前溶液重的80～90％时，加10～20％滤前溶液重的去离子水透析一次，收集滤液和透析液，合并为纳滤分离液，然后采用截留分子量为300Da的纳米膜进行纳滤浓缩，收集纳滤浓缩液；

d、聚酰胺树脂纯化：将上述所得纳滤浓缩液配制成质量浓度为1.5～2.5％的溶液，室温下，通过聚酰胺树脂层析柱进行异硫氰酸酯的分离纯化，得洗脱液，将洗脱液减压浓缩至固形物含量25～35％，回收食用乙醇，收集减压浓缩液；

e、HP2MGL树脂再次纯化：将上述所得减压浓缩液配制成质量浓度为1.5～2.5％的溶液，室温下，通过HP2MGL树脂层析柱进行异硫氰酸酯的分离纯化，收集洗脱液，减压浓缩，回收食用乙醇，浓缩液趁热过滤，滤液结晶，过夜，最后真空冷冻干燥，即得纯度达95％以上的异硫氰酸酯高纯品提取物。

2.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤a中十字花科蔬菜种子选自芥菜籽或青花菜籽。

3.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤a中去离子水的加入量为十字花科蔬菜种子重量的0.8～1.2倍。

4.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤c中纳滤分离的温度为35～40℃，压力为2.4～2.8MPa。

5.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤c中纳滤浓缩的温度为35～40℃，压力为2.8～3.2MPa。

6.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤d中通过聚酰胺树脂层析柱进行异硫氰酸酯的分离纯化是将7～9BV的1.5～2.5％质量浓度的溶液以2.0～3.0BV/h的流速通过聚酰胺树脂层析柱，使树脂吸附至饱和，静置30～50min，然后用3.0～4.0BV质量浓度为15～25％的食用乙醇以1.5～2.5BV/h的流速淋洗除去杂质，再用4～6BV质量浓度为60～80％的食用乙醇以1.0～2.0BV/h的流速洗脱异硫氰酸酯，收集洗脱液。

7.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤e中通过HP2MGL树脂层析柱进行异硫氰酸酯的分离纯化是将5～7BV1.5～2.5％质量浓度的溶液以1.5～2.5BV/h的流速通过HP2MGL树脂层析柱，使树脂吸附至饱和，静置30～50min，然后用2.5～3.5BV质量浓度为25～35％的食用乙醇以1.0～2.0BV/h的流速淋洗除去杂质，再用3～5BV体积浓度为65～75％的食用乙醇以0.8～1.2BV/h的流速洗脱异硫氰酸酯，收集洗脱液。

8.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤b、步骤d和步骤e中减压浓缩的真空度为-0.05～-0.09MPa，温度为50～60℃。

9.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤b和步骤e中真空冷冻干燥的真空度为-0.05～-0.09MPa，温度为-38～-42℃。

10.如权利要求1所述的从十字花科蔬菜种子中提制异硫氰酸酯高纯品的方法，其特征在于，所述步骤e中滤液结晶的温度为0～4℃。