[发明专利]一种pFTM3GW重组载体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201810018621.0 | 申请日： | 2018-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN108103106A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 韦丹;范宇清;连杰;秦志华;马亚锋;皇甫晶晶 | 申请（专利权）人： | 河南省华隆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/62;C12N7/01;C12N5/10;C12N9/50;C07K19/00;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 453000 河南省新*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组载体 制备方法和应用 弗林蛋白酶 柔性氨基酸 连接肽 抗原 免疫治疗效果 慢病毒载体 促进信号 高效表达 稳定结构 协同增效 转染效率 靶向 转导 应用 | ||
1.一种pFTM3GW重组载体，其特征在于，所述pFTM3GW重组载体包括识别NY-ESO-1抗原的特异性T细胞受体和慢病毒载体pFTM3GW；
其中，所述识别NY-ESO-1抗原的特异性T细胞受体顺次包括α链、弗林蛋白酶、SGSG柔性氨基酸、连接肽和β链。
2.根据权利要求1所述的pFTM3GW重组载体，其特征在于，所述连接肽包括P2A和/或T2A。
3.根据权利要求1或2所述的pFTM3GW重组载体，其特征在于，所述连接肽优选为P2A；
优选地，所述P2A的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的pFTM3GW重组载体，其特征在于，所述识别NY-ESO-1抗原的特异性T细胞受体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
其中，所述识别NY-ESO-1抗原的特异性T细胞受体的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的pFTM3GW重组载体，其特征在于，所述重组载体的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
6.一种如权利要求1-5中任一项所述的pFTM3GW重组载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)全序列合成两端包含酶切位点的识别NY-ESO-1抗原的特异性T细胞受体基因；
(2)将步骤(1)得到的基因片段连接到pFTM3GW载体后转化并筛选阳性克隆，构建重组质粒pFTM3GW-NY-ESO-1。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述基因插入到步骤(2)所述载体的BamH I和Xba I位点之间。
8.一种重组慢病毒，其特征在于，所述重组慢病毒通过将权利要求1-5中任一项所述的pFTM3GW重组载体与包装质粒共转染哺乳动物细胞得到；
优选地，所述包装质粒包括psPAX2和pMD2G。
9.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞包括如权利要求1-5中任一项所述的pFTM3GW重组载体和/或如权利要求8所述的重组慢病毒；
优选地，所述宿主细胞为293T、293FT或293LTV中的任意一种或至少两种的组合，优选为293T细胞。
10.一种如权利要求1-5中任一项所述的pFTM3GW重组载体、如权利要求8所述的重组慢病毒或如权利要求9所述的宿主细胞用于制备免疫治疗药物的应用。
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