[发明专利]一种环六肽化合物及其在制备抗肠道病毒药物中的应用

说明书

本发明公开了一种环六肽化合物及其在制备抗肠道病毒药物中的应用。本发明在对药用植物海南粗榧根际土壤来源链霉菌Streptomyces sp.30702的次生代谢产物研究过程中，分离获得一个结构新颖的环六肽soliseptide A，其结构式如式(Ⅰ)所示，该化合物含有罕见的哌嗪酸结构片段，且具有很强的抗肠道病毒活性，且在有效剂量下，对宿主细胞未发现有细胞毒性。因此是开发成为结构新颖、高效低毒的抗肠道病毒药物的理想侯选化合物。

技术领域：

本发明属于天然产物领域，具体涉及一种结构新颖的含有哌嗪酸片段的环六肽soliseptide A及其在制备抗肠道病毒药物方中的应用。

背景技术：

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒感染引起的常见的传染病，见于全球各地，此病多发生于5岁以内儿童，能引起手掌、脚掌、口腔黏膜处发生疱疹，起病时多有发热，伴有咽部疼痛。此病传染性较强，主要通过粪-口途径以及呼吸道飞沫传播，或经接触患者皮肤、黏膜的疱疹液而感染。全球自20世纪70年代发现肠道病毒(EV71)起，先后有3次大范围的由EV71感染所致的HFMD大流行。放线菌(Actinobacteria)是一类极其重要的微生物资源，特别是在发现抗菌、抗病毒、抗肿瘤等抗生素先导化合物领域的贡献是难以估量的。

发明内容：

本发明公开了一种从链霉菌Streptomyces sp.30702中分离得到的结构新颖的具有哌嗪酸片段的环六肽soliseptide A。

本发明人在对来源于药用植物海南粗榧(Cephalotaxus hainanensis)根际土壤链霉菌Streptomyces sp.30702的次生代谢产物研究过程中，发现一个结构新颖的含有哌嗪酸片段的环六肽soliseptide A，其具有很强的抗肠道病毒(EV71)活性，且在有效剂量下，未发现有明显细胞毒性。因此是开发成为高效低毒的抗肠道病毒(EV71)药物的理想侯选化合物。

本发明的环六肽soliseptide A，或其药用盐，其结构式如式(Ⅰ)所示：

本发明的第二个目的是提供一种制备环六肽soliseptide A的方法，其特征在于，所述的环六肽soliseptide A是从链霉菌Streptomyces sp.30702的发酵培养物中制备分离得到的。

优选，所述的制备环六肽soliseptide A的方法，具体步骤如下：

a)、制备链霉菌Streptomyces sp.30702的发酵培养物，将该发酵培养物的发酵液和菌丝体分离开，发酵液经乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏A；菌丝体破碎后用丙酮浸提，浸取液回收丙酮后剩余的水混合液再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层经蒸馏浓缩后得到浸膏B；

b)、将浸膏A和浸膏B合并的粗提物经中压正相液相色谱，用二氯甲烷/甲醇作为洗脱剂，从体积比100：0～0：100进行梯度洗脱，收集二氯甲烷/甲醇体积比95：5梯度洗脱下来的馏分，继续过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20，以分析纯甲醇作为流动相洗脱，收集馏分再采用半制备高效液相进行纯化后得到环六肽soliseptide A。

所述的步骤a)的制备链霉菌Streptomyces sp.30702的发酵培养物，优选为：将活化的链霉菌Streptomyces sp.30702接入种子培养基中，28℃，180rpm，培养72h制得种子液，将种子液以5％的接种量接入到发酵培养基中，28℃，动态摇床培养10天制得发酵培养物，所述的种子培养基和发酵培养基的配方为每升培养基中含有：甘油15mL，大豆粉10g，酵母浸膏10g，KH₂PO₄ 0.5g,MgSO₄·7H₂O 0.5g,CaCO₃ 2g,海水素33g,余量为水，pH 7.2-7.4。