[发明专利]一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用在审
| 申请号： | 201810020986.7 | 申请日： | 2018-01-10 |
| 公开（公告）号： | CN108102935A | 公开（公告）日： | 2018-06-01 |
| 发明（设计）人： | 张俊杰;荆晓艳;孟牒;何培新;胡晓龙;迟雷;杨旭;尚益民;郭晨 | 申请（专利权）人： | 郑州轻工业学院 |
| 主分类号： | C12N1/16 | 分类号： | C12N1/16;A01N63/04;A01P3/00 |
| 代理公司： | 北京东方盛凡知识产权代理事务所(普通合伙) 11562 | 代理人： | 宋平 |
| 地址： | 450000 *** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 平板培养基 拮抗酵母菌 丝瓜 枯萎病 菌球 黄瓜 培养基 稀释 筛选 土壤悬浮液 微生物分离 燕麦 暗箱培养 土壤样品 细菌菌落 运行间隔 植物真菌 拮抗细菌 纯培养 内植物 无菌水 真菌 活化 尖处 菌株 平铺 切取 涂覆 应用 蛋白 并用 保存 观察 | ||
1.一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
步骤一：黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的活化与培养，将供试内植物的多种真菌在PDA平板培养基上进行暗箱培养4.5-5天，切取活化好的植物真菌头部尖处放于PD平板培养基中纯培养；
步骤二：拮抗细菌的分离：获取土壤样品，带回实验室进行微生物分离，然后获得土壤悬浮液，并用无菌水稀释，稀释后分别涂覆在燕麦平板培养基、蛋白平板培养基的地方进行培养4.5-5天，挑取个头大的细菌菌落；进行保存；
步骤三：拮抗细菌的筛选：将步骤一得到的大的菌株制成菌球，然后在干净的PDA平板培养基的下方平铺一层菌球，且在每一个菌球周围按圆周运行间隔设置不同的拮抗细菌；并放置在温度为27度恒温下培养4.5-5天，观察4.5-5天效果；最终选取一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌。
2.根据权利要求1所述的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：所述PDA平板培养基包含马铃薯200-300g，琼脂20-40g，葡萄糖20-40g，蒸馏水1-1.5L，且通过高温杀菌后保存，高温温度控制在200-250度。
3.根据权利要求2所述的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：所述PD平板培养基包含不加琼脂的其他PDA平板培养基。
4.根据权利要求2或3所述的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：所述PDA平板培养基包含马铃薯250g，琼脂30g，葡萄糖30g，蒸馏水1.2L，且通过高温杀菌后保存，高温温度控制在200-250度。
5.根据权利要求1或2所述的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：在步骤一中：黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的活化与培养，将供试内植物的多种真菌在PDA平板培养基上进行暗箱培养4.8天，切取活化好的植物真菌头部尖处放于PD平板培养基中纯培养。
6.根据权利要求1或2所述的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，其特征在于：在步骤三中：拮抗细菌的筛选：将步骤一得到的大的菌株制成菌球，然后在干净的PDA平板培养基的下方平铺一层菌球，且在每一个菌球周围按圆周运行间隔设置不同的拮抗细菌；并放置在温度为27度恒温下培养4.9天，观察4.9天效果；最终选取一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌。
7.一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的应用，其特征在于：包括将获得的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌应用到黄瓜、丝瓜的生成过程中。
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