[发明专利]一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用

说明书

本发明公开了一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用，包括以下步骤：将供试内植物的多种真菌在PDA平板培养基上进行暗箱培养4.5‑5天，切取活化好的植物真菌头部尖处放于PD平板培养基中纯培养；获取土壤样品，带回实验室进行微生物分离，然后获得土壤悬浮液，并用无菌水稀释，稀释后分别涂覆在燕麦平板培养基、蛋白平板培养基的地方进行培养4.5‑5天，挑取个头大的细菌菌落；进行保存；将步骤一得到的大的菌株制成菌球，在PDA平板培养基的下方平铺一层菌球，且在每一个菌球周围按圆周运行间隔设置不同的拮抗细菌；并放置在温度为27度恒温下培养，观察4.5‑5天效果；最终选取一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌。

技术领域

本发明涉及一种真菌筛选的技术领域，尤其是一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用。

背景技术

植物真菌病害给农业生产带来了巨大的损失，而植物土传真菌病害是一类重要的难防御病害，已给现代农业生产尤其是蔬菜生产造成了严重的影响，今年来，实施蔬菜的不断发展，设施栽培的特殊条件导致农作物严重受到土传病害的发生，对蔬菜造成严重的危害，其中枯萎病是一类重要的真菌病害，例如：黄瓜、丝瓜等这类瓜类严重受到枯萎病的影响，目前很多厂家都发明了很多种类的枯萎病拮抗酵母菌，因此如何从这些众多的抗菌体中快速的筛选出一种抗菌品来低于这类病毒尤为重要。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用。

为了实现上述目的，本发明所设计的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法，具体包括以下步骤：

步骤一：黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的活化与培养，将供试内植物的多种真菌在PDA平板培养基上进行暗箱培养4.5-5天，切取活化好的植物真菌头部尖处放于PD平板培养基中纯培养；

步骤二：拮抗细菌的分离：获取土壤样品，带回实验室进行微生物分离，然后获得土壤悬浮液，并用无菌水稀释，稀释后分别涂覆在燕麦平板培养基、蛋白平板培养基的地方进行培养4.5-5天，挑取个头大的细菌菌落；进行保存；

步骤三：拮抗细菌的筛选：将步骤一得到的大的菌株制成菌球，然后在干净的PDA平板培养基的下方平铺一层菌球，且在每一个菌球周围按圆周运行间隔设置不同的拮抗细菌；并放置在温度为27度恒温下培养4.5-5天，观察4.5-5天效果；最终选取一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌。

进一步，所述PDA平板培养基包含马铃薯200-300g，琼脂20-40g，葡萄糖20-40g，蒸馏水1-1.5L，且通过高温杀菌后保存，高温温度控制在200-250度。

进一步，所述PD平板培养基包含不加琼脂的其他PDA平板培养基。所述PDA平板培养基包含马铃薯250g，琼脂30g，葡萄糖30g，蒸馏水1.2L，且通过高温杀菌后保存，高温温度控制在200-250度。

进一步，在步骤一中：黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的活化与培养，将供试内植物的多种真菌在PDA平板培养基上进行暗箱培养4.8天，切取活化好的植物真菌头部尖处放于PD平板培养基中纯培养。

进一步，在步骤三中：拮抗细菌的筛选：将步骤一得到的大的菌株制成菌球，然后在干净的PDA平板培养基的下方平铺一层菌球，且在每一个菌球周围按圆周运行间隔设置不同的拮抗细菌；并放置在温度为27度恒温下培养4.9天，观察4.9天效果；最终选取一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌。

本发明还公开为了一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的应用，其特征在于：包括将获得的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌应用到黄瓜、丝瓜的生成过程中。

本发明得到的一株黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌的筛选方法与应用，能够快速、准确的筛选出黄瓜、丝瓜枯萎病拮抗酵母菌，使得后期能够快速抑制黄瓜、丝瓜枯萎，同时提供植物的生长。

具体实施方式