[发明专利]用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基及其用法

说明书

本发明公开了一种用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基，各组分含量如下，葡萄糖1000‑6000；丙酮酸钠50‑200；精氨酸50‑300；天冬氨酸5‑30；谷氨酰胺300‑1500；赖氨酸100‑200；甲硫氨酸30‑80。本发明具有以下优点和效果：培养基采用无血清的培养基，葡萄糖、维生素、胸苷等提供Hi5细胞及猪圆环病毒增殖所需的营养成分，培养基内加入硫酸软骨素、丝肽、软骨黏连蛋白等，促进Hi5细胞在无血清的培养基内生长和增殖，提高Hi5细胞的存活率；将能表达PCV2 Cap蛋白的重组杆状病毒接种Hi5细胞后，Hi5细胞能对外源基因的高表达性能，表达PCV2 Cap蛋白，用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基，无血清，Hi5细胞生长良好，且能高表达外源基因，制备得到的PCV2 Cap蛋白质量稳定、安全。

技术领域

本发明涉及动物疫苗制备技术领域，特别涉及一种用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基及其用法。

背景技术

猪圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属，为已知的最小的动物病毒之一，病毒粒子直径14-17nm,无囊膜。猪圆环病毒包括PCV1和PCV2两个血清型，PCV1为非致病的病毒，PCV2为致病性的病毒，成为危害养殖业的重要病毒之一。PCV2基因组为单链闭合环状DNA，全长1767bp或1768bp，含有ORF1和ORF2两个主要的开放阅读框，其中ORF1编码病毒复制相关蛋白(Rep),ORF2编码病毒的结构蛋白(Cap)。Cap蛋白为PCV2的主要免疫性蛋白，可以刺激机体产生中和抗体，清除体内病毒并使机体免受病毒损伤，单独的Cap蛋白可以自我组装成病毒样颗粒，由于不含病毒基因组，不能复制，但依然可以刺激机体产生抗体，大大提高了疫苗使用的安全性。

现有技术中已出现能表达PCV2的Cap蛋白的重组杆状病毒，如张永武等人公开于“动物医学进展”2016,37(3)：14-18上的文献“表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒的构建及鉴定”。重组杆状病毒需要转染SF9细胞后进行传代，获得含有Cap蛋白的病毒液，以用作猪圆环亚单位疫苗。

但是上述文献中在Cap蛋白表达过程中存在以下问题：昆虫细胞杆状病毒表达载体系统是继大肠杆菌、酵母菌和哺乳动物细胞之后的基因工程表达载体系统，主要包括SF9细胞系和Hi5细胞系，Hi5细胞系即粉纹夜蛾卵巢细胞系。SF9细胞系外源基因表达性能较弱，用于工业大规模生产时，成本较高，无法实现批量生产。Hi5细胞系虽然具有外源基因表达性能高的作用，但是现有技术中还没有出现用于Hi5细胞转染重组杆状病毒后表达Cap蛋白的培养体系。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种用于Hi5细胞制备猪圆环亚单位疫苗的培养基，包括以下组分，单位以毫克/升计，各组分含量如下，葡萄糖1000-6000；丙酮酸钠50-200；精氨酸50-300；天冬氨酸5-30；谷氨酰胺300-1500；赖氨酸100-200；甲硫氨酸30-80；色氨酸5-20；丝氨酸5-20；生物素0.001-0.2；叶酸2-5；烟酰胺2-10；硫胺素2-10；硫酸铜5-20；硫酸铁0.1-2；硫酸镁10-50；硫酸软骨素30-40；丝肽20-50；氯化钠200-300；氯化钾250-400；磷酸氢二钠100-150；磷酸二氢钠100-150；亚硒酸钠20-50；豆蔻酸0.01-0.2；棕榈酸0.01-0.1；棕榈油酸0.01-0.03；转铁蛋白10-60；胰岛素10-50；表皮生长因子10-30；白蛋白10-40；软骨黏连蛋白20-40；艾杜糖醛酸5-30；亚麻酸10-20；油酸10-20；卵磷脂10-20；棉子糖10-25；水苏糖20-30。

通过采用上述技术方案，动物细胞培养基，多需要加入动物血清，以提供动物细胞生长所需的营养成分及细胞保持正常形态的支撑蛋白。但是培养基内加入动物血清存在以下问题，动物血清成分复杂，难以确定，生产出来的动物疫苗质量和安全不易控制。