[发明专利]龙眼叶乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱的建立方法

说明书

本发明公开了一种龙眼叶乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。该方法包括步骤：供试品溶液的制备；含有没食子酸乙酯、紫云英苷和槲皮素对照品溶液的制备；采用HPLC测定，得到指纹图谱。本发明方法具有快速、准确，精密度高，重复性、稳定性好，色谱峰信息丰富且分离效果好等优点。本发明所建立的龙眼叶乙酸乙酯部位HPLC标准指纹图谱能有效地表征龙眼叶的质量，尤其是龙眼叶乙酸乙酯部位的质量，进一步提高了龙眼叶药材标准，完善了龙眼叶的质量评价体系，促进中药标准化，为龙眼叶质量的全面、有效控制提供了理论和实践基础，为临床用药的安全、有效提供准确可靠的依据。

技术领域

本发明中药材的质量控制方法，具体涉及龙眼叶乙酸乙酯部位高效液相色谱法指纹图谱的构建方法和标准指纹图谱。

背景技术

龙眼叶，是一味具有广西民族特色的中药材，最早记载于《滇南本草图说》。为无患子科龙眼属龙眼的叶或嫩芽，广西、广东、福建及台湾等省区是主产区，海南、云南、四川和贵州等省也有栽培。其性味甘、淡、平，具有发表清热、利湿解毒等功效。主要用于治疗感冒发热、疟疾、疔疮、湿疹等。龙眼叶主要含有鞣质、酚酸类、黄酮类及挥发油等成分。目前国内对龙眼叶化学成分的研究报道不多，主要集中在黄酮类成分方面。发明人曾对龙眼叶进行了系统的化学成分研究，发现其主要活性成分为黄酮成分。已有研究表明龙眼叶具有明显的降血糖，抗氧化等药理作用，发明人通过研究龙眼叶不同提取部位对Ⅱ型糖尿病小鼠的药理作用，发现其抗Ⅱ型糖尿病的有效部位主要为乙酸乙酯部位。另外，发明人曾经进行的龙眼叶降血糖作用研究结果表明从龙眼叶中提取分离所得的乙酸乙酯部位中的羽扇豆醇、没食子酸乙酯、山柰酚、木犀草素、槲皮素、紫云英苷等成分对α-葡萄糖苷酶均有较强的抑制作用，发明人还对这些活性成分进行了含量测定方法研究，确定了同时测定这5种成分的含量测定方法。

中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。它可以较全面地反映药材所含化学成分的种类和数量，有效地体现中药成分的整体性和综合作用，以其快速、准确等特点已被广泛应用于中药分析鉴定和质量控制等方面。指纹图谱反映的是样品整体的特征，进行指纹图谱比较，可以反映样品之间的整体差异以及亲疏程度。发明人曾对龙眼叶药材HPLC指纹图谱进行了研究，确定其HPLC指纹图谱测定方法及其标准指纹图谱，得到包括槲皮素、木犀草素及山柰素3个成分在内的11个共有峰。发明人还曾采用傅里叶红外光谱(FTIR)技术对不同产地龙眼叶的指纹图谱进行研究，确定了FTIR指纹图谱测定方法，并得到了具有5个共有峰的红外标准指纹图谱。为进一步提高龙眼叶药材标准，促进中药标准化，保证和提高龙眼叶药材质量，为临床用药的安全、有效提供准确可靠的依据，发明人在前期对龙眼叶研究的基础上对龙眼叶抗Ⅱ型糖尿病的有效部位——乙酸乙酯部位的指纹图谱进行了研究，目前未见相关报道。

以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。

发明内容

为进一步提高龙眼叶标准，促进中药标准化，保证和提高龙眼叶质量，为临床用药的安全、有效提供准确可靠的依据，本发明提供一种龙眼叶乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱的建立方法，并由此方法得到的龙眼叶乙酸乙酯部位标准指纹图谱。

本发明所采用的技术方案如下：

一种龙眼叶乙酸乙酯部位HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

S1.供试品溶液的制备：取龙眼叶粗粉2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，先加20ml95％乙醇超声1h，再加入20ml 50％乙醇超声30min，过滤，滤液蒸干，加水混悬于分液漏斗，加入等量石油醚反复萃取，至萃取出的石油醚层无色，取下层溶液，再加入等量乙酸乙酯反复萃取，直至萃取出的乙酸乙酯层无色，合并乙酸乙酯层，蒸干，精密加入甲醇2ml，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；