[发明专利]一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种鹰嘴豆豆瓣多肽的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、将鹰嘴豆发芽脱皮后的干燥的豆瓣粉碎，过80目筛，按w/v豆粉:石油醚=1:5加入石油醚，在室温下振荡4h进行脱脂，反复提取3-4次至无色为止，鹰嘴豆豆瓣粉自然沉降与石油醚分离后，倾倒出上层石油醚进行回收，合并沉淀物，自然干燥，得到脱脂的鹰嘴豆豆瓣粉，置于温度-20℃冰箱保存备用；

b、将步骤a中脱脂后的100g鹰嘴豆豆瓣粉中加350ml pH为7.4，0.1M的磷酸缓冲液，料液比为1:3.5，温度为4℃，提取48h；

c、将步骤b中的提取液经过滤、10000r/min，温度4℃，离心10min，温度4℃，透析48h，压力9.8Pa，温度-80℃，冻干24h，得到10.27g粗提蛋白粉，蛋白提取率为10.27%；

d、将步骤c中的粗提蛋白粉电泳，测抗菌活性，测蛋白含量19.14%；

e、将步骤d中的粗提蛋白粉通过中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶或木瓜蛋白酶水解，得到的鹰嘴豆豆瓣总多肽，再经超滤，分离，酶解，冷冻干燥得到多肽粉；

f、将步骤e中的酶解物离心，取上清液经10kDa再生纤维滤膜截流分离，压力0.10MPa，温度25℃，流速35m/s，保留浓缩液，再将滤出液分别经6kDa，3.5kDa再生纤维滤膜截流分离，依次制备分子量为6-10kDa，3.5-6kDa，1-3.5kDa的多肽，然后取各部分多肽溶液进行真空干燥，利用液质联LC/MS仪器检测不同分子量多肽。

2.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备抗细菌的药物中的用途，所述细菌为表皮葡萄球菌，大肠杆菌，克雷白氏杆菌和鼠伤寒沙门氏杆菌。

3.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备抗真菌的食品中的用途，所述真菌为白色念珠菌。

4.根据权利要求1所述方法获得的鹰嘴豆豆瓣多肽在制备食品添加剂中的用途。