[发明专利]一种鉴定烟草PVY抗性的引物、检测方法和试剂盒在审
| 申请号： | 201810026574.4 | 申请日： | 2018-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN110029183A | 公开（公告）日： | 2019-07-19 |
| 发明（设计）人： | 刘旦;龚敏;杨爱国;程立锐;蒋彩虹;冯全福;王元英 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院烟草研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 济南日新专利代理事务所 37224 | 代理人： | 刘亚宁 |
| 地址： | 266101 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 引物 检测 烟草 试剂盒 种鉴定 抗性 生物基因检测 特异性引物 基因序列 抗性鉴定 区域设计 烟草品种 烟草种质 育种材料 育种效率 育种周期 通量 翻译 基因 检验 应用 | ||
1.一种鉴定烟草PVY抗性的引物，其特征在于，所述的引物为用于检测烟草PVY感病基因eIF4E1序列设计得特异性引物，包括上游引物PVY1F和下游引物PVY1R；
其中，所述的上游引物PVY1F核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述的下游引物PVY1R核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种鉴定烟草PVY抗性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、提取被检测烟草材料的DNA；
S2、将步骤S1中所述的被检测烟草材料的DNA为模板，使用特异性引物对DNA模板进行PCR扩增，得到DNA扩增产物；
S3、将DNA扩增产物采用琼脂糖凝胶电泳检测，当PCR扩增产物在凝胶中出现348bp对应的电泳条带时，所述被检测烟草材料不含eIF4E1基因，具有PVY抗性；当PCR扩增产物在凝胶中没有出现348bp对应的电泳条带时，所述被检测烟草材料不具有基于eIF4E1基因控制的PVY抗性；
步骤S2中所述的特异性引物为权利要求1所述的鉴定烟草PVY抗性的引物。
3.根据权利要求2所述的鉴定烟草PVY抗性的检测方法，其特征在于，步骤S2中所述的PCR扩增的反应体系如下：
2×Power Taq PCR MasterMix 10μl；
10μM上游引物1μl；
10μM下游引物1μl；
双蒸水补至20μl。
4.根据权利要求2所述的鉴定烟草PVY抗性的检测方法，其特征在于，步骤S2中所述的PCR扩增的反应条件如下：
95℃预变性2min；
95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；
最后72℃延伸7min。
5.根据权利要求2所述的鉴定烟草PVY抗性的检测方法，其特征在于，步骤S2中所述的DNA的模板在PCR扩增的反应体系的用量为50-100ng。
6.一种鉴定烟草PVY抗性的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：PCR反应试剂和引物；所述引物为权利要求1所述的鉴定烟草PVY抗性的引物。
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