[发明专利]一种鉴定烟草PVY抗性的引物、检测方法和试剂盒

说明书

本发明属于生物基因检测领域，具体涉及到一种鉴定烟草PVY抗性的引物、检测方法和试剂盒，该引物对的序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示，检验方法为：针对烟草eIF4E1基因序列特异区域设计一对特异性引物，以待检测烟草品种DNA为模板，通过PCR扩增翻译检测eIF4E1基因；本发明的引物及其检测方法具有操作简单、结果可靠、检测速度快、通量高等优点，可以极大地加速抗PVY育种材料的选育过程，缩短育种周期，提高育种效率，还可应用于烟草种质资源和品种PVY抗性鉴定。

技术领域

生物基因检测领域，具体涉及到一种鉴定烟草PVY抗性的引物、检测方法和试剂盒。

背景技术

PVY病毒属于系统性浸染病毒，主要寄生在茄科植物上如烟草，番茄，辣椒，茄子等作物。据不完全数据统计，2012年-2015年我国烟草受PVY病毒危害累计116万亩，烟叶产量损失超过17000吨，经济损失超过2.75亿元。目前并没有有效的治疗PVY的手段，选育抗PVY的品种乃是最经济、最有效的措施。

传统抗PVY育种过程中，PVY抗性鉴定方法主要是大田接种鉴定和温室接种鉴定。这两个方法操作繁琐、工作量大，鉴定周期长，受种植环境的影响，不可控因素多，而且接种病毒的成功与否也直接影响鉴定结果，进而影响对烟草品种PVY抗性的判断。

目前生产上主要利用的PVY病毒病抗源来自于白肋烟VAM(Virgin A Mutant)，其抗性由一对隐性基因控制(va)。针对该抗性位点，国内外开发了相关的分子标记(RAPD、SCAR)。但这些标记与PVY抗性的遗传距离较远，利用标记数据判断抗性误差较大。2015年，Julio等通过图位克隆的方法将va基因定位在烟草第21号连锁群上并获得了基因序列。该基因是一个感病基因，为真核生物翻译起始因子eIF4E1，在丧失功能后能够限制马铃薯Y病毒属病毒在细胞间的移动，进而增加植物的PVY抗性。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明提供一种鉴定烟草PVY抗性的引物、检测方法和试剂盒，利用PVY感病基因eIF4E1序列设计特异性引物检测不同烟草品种PVY抗性；本发明的抗性鉴定方法不受生长条件和发育时期的影响，可以快速高效的检测基于eIF4E1基因控制的PVY抗性，加快育种进程，提高育种效率。

本发明的目的之一是提供一种鉴定烟草PVY抗性的引物，目的之二是提供利用该引物进行扩增目的核苷酸序列，然后进行鉴定的检测方法，目的之三是一共一种含有该引物的试剂盒，本发明的引物及其检测方法具有操作简单、结果可靠、检测速度快、通量高等优点，可以极大地加速抗PVY育种材料的选育过程，缩短育种周期，提高育种效率，还可应用于烟草种质资源和品种PVY抗性鉴定。

本发明的目的之一是通过以下技术方案来实现：

该鉴定烟草PVY抗性的引物，所述的引物为用于检测烟草PVY感病基因eIF4E1序列设计得特异性引物，包括上游引物PVY1F和下游引物PVY1R；

其中，所述的上游引物PVY1F核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

为：5’-AACCACCCAAGCAAGTTAGT-3’；

所述的下游引物PVY1R核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示：

为：5’-ATTTTATCCCCCTTATTTCG-3’。

本发明所述的eIF4E1基因序列特异区域的序列如下：