[发明专利]一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株及其产孢方法

权利要求书

1.一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株，其特征在于：保藏号CGMCC No.9514。

2.权利要求1所述鸡源凝结芽孢杆菌菌株在制备抑菌剂方面的应用。

3.应用权利要求1所述鸡源凝结芽孢杆菌菌株的产孢方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)制备产孢培养基平板，所述产孢培养基的配方为：葡萄糖10-20g/L，蛋白胨10-20g/L，酵母浸粉5-10g/L，牛肉膏0.3-0.5g/L，氯化钠1-2g/L，碳酸钙1-2g/L，硫酸镁0.5-1g/L，磷酸氢二钾0.5-1g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，琼脂粉15-20g/L，pH 6.8-7.0；

(2)制备凝结芽孢杆菌产孢液，其制备方法为：将筛选出的鸡源凝结芽孢杆菌-80℃保藏甘油管快速溶化，直接接种于YPD培养基中，装液量25-100ml/250ml，培养方法为温度40℃，转速160-180rpm，培养时间16-20小时；

(3)将凝结芽孢杆菌产孢液划线于产孢培养基平板上培养至生成大量芽孢。

4.根据权利要求3所述的产孢方法，其特征在于：所述步骤(1)中产孢培养基含有葡萄糖12g/L，蛋白胨10g/L，酵母浸粉10g/L，牛肉膏0.5g/L，氯化钠1g/L，碳酸钙1g/L，硫酸镁0.5g/L，磷酸氢二钾0.5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸锰0.2g/L，琼脂粉15g/L，pH 6.8。

5.根据权利要求3所述的产孢方法，其特征在于：所述步骤(3)中培养方法是划线、涂布，使菌落分散开后，倒置于40℃的恒温恒湿培养箱中培养5-7天。

6.应用权利要求1所述鸡源凝结芽孢杆菌菌株的发酵产孢方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)一级种子液制备：取-80℃保存的冷冻甘油管直接接种于YPD培养基中培养；

(2)二级种子液制备：将步骤(1)培养的一级种子液接种于二级种子液培养基中培养，所述二级种子液培养基配方为葡萄糖5-10g/L，蛋白胨5-10g/L，酵母浸粉3-5g/L，牛肉膏0.5-1g/L，氯化钠1-2g/L，碳酸钙1-2g/L，硫酸镁0.5-1g/L，磷酸氢二钾0.5-1g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，pH 6.8-7.0；

(3)发酵：将步骤(2)培养的二级种子液接种到5L发酵罐中发酵，发酵期间调节发酵液pH值，适时补料，至菌体产生大量芽孢为止，其中发酵罐中培养基配方为葡萄糖10-20g/L，蛋白胨10-20g/L，酵母浸粉5-10g/L，牛肉膏0.3-0.5g/L，氯化钠1-2g/L，碳酸钙1-2g/L，硫酸镁0.5-1g/L，磷酸氢二钾0.5-1g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，pH6.8-7.0，接种量4-8％，发酵温度40℃，罐压0.02-0.1MPa，搅拌转速350-500rpm，通风量3-6L/min，当发酵液pH开始降低后，自动补充氨水，发酵后期自动补充磷酸，全程发酵pH维持在6.8，发酵4-7小时后，流加补料180-200g/L的葡萄糖和100-150g/L的酵母浸粉混合液，补加量为发酵液体积的7-10％，发酵48-52h。

7.根据权利要求5所述的发酵产孢方法，其特征在于：所述步骤(1)中所述一级种子培养是将筛选出的鸡源凝结芽孢杆菌-80℃保藏甘油管快速溶化，直接接种于YPD培养基中，接种量2-4％，装液量50-100m l/250m l，培养温度40℃，转速160-180rpm，培养时间16-20小时，所述YPD培养基配方为葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母浸粉10g/L，pH6.5。

8.根据权利要求5所述的发酵产孢方法，其特征在于：所述步骤(1)中的装液量50-100ml/250m l，培养温度40℃，转速160-180rpm，培养时间16-20小时。