[发明专利]一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株及其产孢方法

说明书

本发明提供了一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株及其产孢方法，所述鸡源凝结芽孢杆菌菌株的保藏号CGMCC No.9514，具有抑菌性能，可在制备抑菌剂方面进行应用，可应用于平板产孢方法和液体发酵产孢方法，有利于今后生产和应用。

技术领域

本发明涉及微生物领域，尤其是一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株及其产孢方法。

背景技术

凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)，革兰氏阳性菌，能形成内生孢子，发酵产生L-乳酸，是同型乳酸发酵菌，又称为乳酸芽孢杆菌。是经美国药品食品管理局(FDA)批准的一种“普遍认为安全”的菌种，是目前效果最为确切的益生菌。口服后，凝结芽孢杆菌在动物的盲、结和直肠定植，发酵产生大量抗菌凝固素、乳酸、氨基酸、维生素和多种消化酶。

凝结芽孢杆菌经人工胃液(pH1.4)处理2小时后的存活率为95.29％。研究表明凝结芽孢杆菌对人工胃液的酸性条件耐受性极强，其存活不受影响，明显优于其它微生态制剂，能顺利通过胃进入肠道，从而保证药效的正常发挥，将凝结芽孢杆菌密封于塑料瓶内，置于55℃干燥箱内处理60小时后，测定活菌数的结果表明，仍不低于1亿cfu/g，水分含量无明显改变，凝结芽孢杆菌制剂可以在室温保存，有效期可达24个月。

凝结芽孢杆菌的功能特点：(1)有效抑制有害菌的生长，改良肠道微生态环境，促进肠道发育，增强肠道功能；(2)提高饲料品质，促进饲料的消化吸收，降低料肉比；(3)有效改善断奶仔猪由于应激和过敏反应引起的菌群失调性腹泄；(4)无任何毒副作用，使用安全，并可降低环境中的氨气、硫化氢等有害气体，改善养殖环境。

凝结芽孢杆菌生长缓慢，平板培养24小时，肉眼不能看到菌落，凝结芽孢杆菌在普通YPD平板上不能形成芽孢，菌种容易死亡，复活率低，关于平板形成芽孢的技术方法至今仍没有相关报道，与此同时，液体产孢技术虽有报道但是活菌数和芽孢数都偏低，不能达到生产的要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株。

本发明所要解决的另一技术问题在于提供应用上述鸡源凝结芽孢杆菌菌株的产孢方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种鸡源凝结芽孢杆菌菌株，保藏号CGMCC No.9514。

上述菌株是从鸡粪便中分离出了一株厚壁菌门，杆菌纲，芽孢杆菌目，芽孢杆菌科，芽孢杆菌属的凝结芽孢杆菌，该菌革兰氏染色呈阳性，有良好的产乳酸性能，又能产生芽孢，将其命名为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。

上述鸡源凝结芽孢杆菌菌株具有抑菌性能，可在制备抑菌剂方面进行应用。

应用上述鸡源凝结芽孢杆菌菌株的产孢方法，具体步骤如下：

(1)制备产孢培养基平板，所述产孢培养基的配方为：葡萄糖10-20g/L，蛋白胨10-20g/L，酵母浸粉5-10g/L，牛肉膏0.3-0.5g/L，氯化钠1-2g/L，碳酸钙1-2g/L，硫酸镁0.5-1g/L，磷酸氢二钾0.5-1g/L，磷酸二氢钾1-2g/L，硫酸锰0.05-0.2g/L，琼脂粉15-20g/L，pH6.8-7.0；

(2)制备凝结芽孢杆菌产孢液，其制备方法为：将筛选出的鸡源凝结芽孢杆菌-80℃保藏甘油管快速溶化，直接接种于YPD培养基(酵母浸出粉胨葡萄糖培养基)中，装液量25-100ml/250ml，培养方法为温度40℃，转速160-180rpm，培养时间16-20小时；

(3)将凝结芽孢杆菌产孢液划线于产孢培养基平板上培养至生成大量芽孢。