[发明专利]用于检测氯霉素的试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种用于检测氯霉素的试纸条，包括支撑板(1)，支撑板(1)上排布硝化纤维素膜(2)，硝化纤维素膜(2)的一端自硝化纤维素膜(2)起自下而上排布结合垫(3)和样品垫(4)，硝化纤维素膜(2)与结合垫(3)相对的另一端上铺设吸水垫(5)，硝化纤维素膜(2)上划检测线(6)和控制线(7)，其特征在于：

结合垫(3)包被纳米金-氯霉素适配体复合物，氯霉素适配体的核苷酸序列为：

3'-AGC-AGC-ACA-GAG-GTC-AGA-TGA-CTG-AGG-GCA-CGG-ACA-GGA-GGG-CAT-GGA-GAG-ATG-GCG-TTT-TTT-TTT-5'，其5'端采用疏基修饰；

检测线(6)包被探针A复合物，探针A复合物由链霉亲和素和生物素修饰的探针A溶液混合制得，探针A的核苷酸序列为：

5'-CGC-CAT-CTC-TCC-ATG-CCC-TCC-TGT-CCG-TGC-CCT-CAG-TCA-TCT-GAC-CTC-TGT-GCT-GCT-3'，其3'端用生物素修饰；

控制线(7)包被探针B复合物，探针B复合物由链霉亲和素和生物素修饰的探针B溶液混合制得，探针B的序列为：

3'-AAA-AAA-AAA-5'，其3'端采用生物素修饰；

纳米金-氯霉素适配体复合物按照如下方法制得：

氯霉素适配体和纳米金溶液以体积比为1:5-6的比例混合，室温孵育6.5-8h，加入氯化钠至浓度为45-50mmol/L；在室温下继续活化11-12h，在6000-7000r/min的转速下离心10-15min，得到的浓缩物为纳米金-氯霉素适配体复合物；

纳米金的粒径为15-35nm，纳米金采用柠檬酸三钠还原氯金酸制得，柠檬酸三钠与氯金酸以体积比为2-2.5:1的比例混合，在300-350r/min的转速下，温度为100-110℃下搅拌11-12min，制得纳米金溶液；

样品垫(4)采用牛血清白蛋白做封闭处理，牛血清白蛋白溶液的浓度为1％。

2.根据权利要求1所述的用于检测氯霉素的试纸条，其特征在于：纳米金-氯霉素适配体复合物包被在结合垫(3)上，并在35-37℃烘干7-12min。

3.根据权利要求1所述的用于检测氯霉素的试纸条，其特征在于：探针A复合物按照如下方法制得：18-20μL浓度为2-3mg/mL的链霉亲和素与8-10μL浓度为90-100μmo1/L的生物素修饰的探针A溶液在室温下混合2-2.5h。

4.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测氯霉素的试纸条，其特征在于：链霉亲和素采用非疏基化链霉亲和素。

5.根据权利要求1-3任一项所述的用于检测氯霉素的试纸条，其特征在于：氯霉素的检测范围为0.5-160μg/mL。

6.一种权利要求1-5任一项所述的用于检测氯霉素的试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

硝化纤维素膜(2)、结合垫(3)、样品垫(4)和吸水垫(5)分别固定在支撑板(1)上，样品垫(4)、结合垫(3)之间重叠1.5-2.5mm，支撑板(1)宽度为4-4.5mm；支撑板(1)上划检测线(6)和控制线(7)；

结合垫(3)上浸润纳米金-氯霉素适配体复合物在35-37℃烘干7-12min备用；

与氯霉素适配体部分互补的探针A溶液和链霉亲和素在室温下孵育2-2.5h制得探针A复合物，并包被在检测线(6)处；

与氯霉素适配体另一部分互补的探针B溶液和链霉亲和素在室温下孵育2-2.5h制得探针B复合物，并包被在控制线(7)处；

硝化纤维素膜(2)放置在37℃干燥8-12h，放于4℃下干燥保存。