[发明专利]用于检测氯霉素的试纸条及其制备方法

说明书

本发明涉及一种用于检测氯霉素的试纸条及其制备方法，其中用于检测氯霉素的试纸条包括支撑板，支撑板上排布硝化纤维素膜，硝化纤维素膜的一端自硝化纤维素膜起自下而上排布结合垫和样品垫，硝化纤维素膜与结合垫相对的另一端上铺设吸水垫，硝化纤维素膜上划检测线和控制线，结合垫上添加纳米金‑氯霉素适配体复合物，检测线由结合了链霉亲和素的生物素修饰的互补探针A溶液制得；控制线由结合了链霉亲和素的探针B溶液划线制得；采用以上方法制得的试纸条具有较好的一致性、稳定性和敏感性。

技术领域

本发明涉及使用试纸条技术识别氯霉素，具体涉及一种用于检测氯霉素的试纸条及其制备方法。

背景技术

氯霉素属于一种高效广谱的抗生素，但是氯霉素具有较强的毒副作用，长期摄入会使大肠杆菌、沙门氏菌等多种菌株产生耐药性，容易造成动物机体菌群失调，抵抗力下降。我国规定在所有食品动物的可食用组织中均不得检出氯霉素，因此，需要一种快速、灵敏检测生物环境中的氯霉素的方法。

通常采用抗体检测氯霉素，将抗体作为生物识别因子，利用抗原抗体的特异性识别进行氯霉素检测。但是抗体成本较高，不方便保存，而且制备抗体时需要活体中产生免疫，批次稳定性较差。目前，更多的研究转向采用核酸适配体检测氯霉素，即通过一段经过体外筛选得到的寡核苷酸序列或者短的多肽，能与相应的配体进行高亲和力和强特异性的结合。如申请日为2015年6月10日，申请公布号为CN104865216A的中国专利公开的一种基于纳米金核酸适配体比色检测氯霉素的方法，其将金纳米颗粒、能够对氯霉素特异性识别的核酸适配体和阳离子聚合物混合形成稳定的复合物；待测溶液和复合物结合释放阳离子聚合物；金纳米颗粒在阳离子聚合物的作用下团聚形成较大颗粒，导致金纳米颗粒团簇在不同波长处表现出的筒的颜色；根据颜色的变化确定待测样品中氯霉素的浓度。但是其采用的是溶液显色的方法，即需要现场配置溶液，在溶液中进行显色反应。在实际应用中较为不便。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测氯霉素的试纸条，其具有较好的一致性、稳定性和敏感性。

本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种用于检测氯霉素的试纸条，包括支撑板，支撑板上排布硝化纤维素膜，硝化纤维素膜的一端自硝化纤维素膜起自下而上排布结合垫和样品垫，硝化纤维素膜与结合垫相对的另一端上铺设吸水垫，硝化纤维素膜上划检测线和控制线，

结合垫包被纳米金-氯霉素适配体复合物，氯霉素适配体的核苷酸序列为3’-AGC-AGC-ACA-GAG-GTC-AGA-TGA-CTG-AGG-GCA-CGG-ACA-GGA-GGG-CAT-GGA-GAG-ATG-GCG-TTT-TTT-TTT-5’，其5’端采用巯基修饰；

检测线包被探针A复合物，探针A复合物由链霉亲和素和生物素修饰的探针A溶液混合制得，探针A的核苷酸序列为5’-CGC-CAT-CTC-TCC-ATG-CCC-TCC-TGT-CCG-TGC-CCT-CAG-TCA-TCT-GAC-CTC-TGT-GCT-GCT-3’，其3’端用生物素修饰；

控制线包被探针B复合物，探针B复合物由链霉亲和素和生物素修饰的探针B溶液混合制得，探针B的序列为3’-AAA-AAA-AAA-5’，其3’端采用生物素修饰。

本申请采用氯霉素适配体对氯霉素进行检测，并且采用试纸条法，从适配体库中筛选合适的氯霉素适配体，该氯霉素适配体一部分与氯霉素互补配对，另一部分与探针B互补配对；其中探针A和氯霉素与氯霉素适配体竞争结合。选择的氯霉素适配体的核苷酸序列一定，采用本方法检测氯霉素一致性较好。