[发明专利]血液破壁生长因子的制备方法及其应用

说明书

本申请提供了血液破壁生长因子的制备方法及其应用。通过本申请提供的制备方法获得的非人类血液破壁生长因子，具有较高产量及市场化价值，主要应用于皮肤再、皮肤美白或皮肤抗氧化/抗衰老等。

技术领域

本申请属于生物技术领域，涉及血液破壁生长因子的制备方法及其应用。

背景技术

生长因子是天然存在于体内的蛋白质，有刺激和增强细胞生长和组织修复的能力。血液中的血小板储存着大量具活性的生长因子。

目前用于伤口愈合及运动创伤大部分采用血液高浓度血小板血浆，即PRP。然而，从患者中提取的PRP必须是使用新鲜的，不能长时间储存。血小板的平均寿命通常只有在提取后的5至9天，然而正常的PRP治疗程序需要进行为期3至6个月。通常，每次接收PRP之前治疗时，患者必须经受静脉穿刺等待30分钟以上为了提取PRP。因此，将PRP中生长因子的保质期延长能让治疗过程中避免多次抽血，节省医生和病人的时间和劳动，并降低PRP生产成本。

发明内容

一方面，本申请提供了血液破壁生长因子的制备方法，其包括以下步骤：分离血液，以获得高浓度血小板血浆；以及裂解高浓度血小板血浆，以获得生长因子提取液。

在一实施方案中，本申请提供的血液破壁生长因子的制备方法包括以下步骤：分离血液，以获得高浓度血小板血浆；裂解高浓度血小板血浆，以获得生长因子提取液；以及过滤生长因子提取液，以去除污染物。

在另一实施方案中，本申请提供的血液破壁生长因子的制备方法包括以下步骤：分离血液，以获得高浓度血小板血浆；裂解高浓度血小板血浆，以获得生长因子提取液；过滤生长因子提取液，以去除污染物；以及冷冻干燥经过滤的生长因子提取液。

在另一实施方案中，本申请所提供的制备方法还包括在所获得的高浓度血小板血浆中加入缓冲剂以使其pH值稳定的步骤。在具体实施方案中，所述缓冲剂为HEPES、磷酸缓冲盐溶液(PBS)或是生理盐水等。

在一实施方案中，所述制备方法中分离血液的步骤通过离心来实现。在具体实施方案中，所述离心条件如下：800-2300克/分钟。在另一具体实施方案中，所述离心进行3次。

在一实施方案中，所述制备方法中裂解高浓度血小板血浆的步骤通过冷冻/重溶、超声或研磨来实现。在具体实施方案中，所述冷冻/重溶条件如下：-50℃至-60℃冷冻20-30分钟，35℃至40℃重溶5-15分钟。在另一具体实施方案中，所述冷冻/重溶进行至少2次。在另一具体实施方案中，所述超声条件如下：185W，40kHz超声10-20分钟。

在具体实施方案中，本申请所提供的破壁生长因子的制备方法，其包括以下步骤：血液以800-2300克/分钟离心3次，获得高浓度血小板血浆；以及高浓度血小板血浆通过至少2次冷冻/重溶，或者至少10分钟超声裂解，获得生长因子提取液。

在另一具体实施方案中，本申请所提供的破壁生长因子的制备方法，其包括以下步骤：血液以800-2300克/分钟离心3次，获得高浓度血小板血浆；高浓度血小板血浆通过至少2次冷冻/重溶，或者至少10分钟超声裂解，获得生长因子提取液；以及生长因子提取液经过滤后，进行冷冻干燥保存。

在上述的破壁生长因子的制备方法中，所述离心第1次进行5-10分钟，第2次进行5-10分钟，第3次进行10-20分钟，

在上述的破壁生长因子的制备方法中，所述冷冻/重溶条件如下：-50℃至-60℃冷冻20-30分钟，35℃至40℃重溶5-15分钟，并且所述冷冻/重溶优选进行2至5次。

在上述的破壁生长因子的制备方法中，所述超声条件如下：185W，40kHz超声10-20分钟。

在另一具体实施方案中，本申请所提供的制备方法中，所述血液源自以下动物：哺乳类、鸟类、爬行类、两栖类及鱼类。在具体实施方案中，所述血液源自鱼类。