[发明专利]一种提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法有效
| 申请号： | 201810031624.8 | 申请日： | 2018-01-12 |
| 公开（公告）号： | CN108148870B | 公开（公告）日： | 2021-09-21 |
| 发明（设计）人： | 宋文;张玉梅;雒静;何奕德 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第四军医大学 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 徐文权 |
| 地址： | 710032 陕西*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 聚糖 体外 转运 sirna 效率 方法 | ||
1.一种提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分别配制壳聚糖溶液和siRNA溶液，将壳聚糖溶液和siRNA溶液按10：1的体积比混合均匀，形成壳聚糖/siRNA复合物；
其中，所用壳聚糖的分子量为30kDa，脱乙酰度在85％～95％之间；壳聚糖溶液的浓度为0.8～1mg/ml，siRNA溶液的浓度为20μM；将壳聚糖溶液和siRNA溶液采用直接混合静电相互作用的方法，震荡30s，形成壳聚糖/siRNA复合物；
2)将步骤1)形成的壳聚糖/siRNA复合物在含钙镁的汉克缓冲盐溶液中转染细胞，具体操作为：
将细胞提前一天接种于24孔板内，在转染当天将培养液换成含钙镁的HBSS，随后加入壳聚糖/siRNA复合物，使得siRNA的终浓度为40nM，转染4小时后换成普通培养液。
2.根据权利要求1所述的提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法，其特征在于，溶解壳聚糖采用pH为5.5且浓度为0.2M的醋酸钠缓冲液；溶解siRNA采用RNase-free水。
3.一种提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分别配制壳聚糖溶液和siRNA溶液；
其中，所用壳聚糖的分子量为30kDa，脱乙酰度在85％～95％之间；所述壳聚糖溶液的浓度为0.8～1mg/ml，所述siRNA溶液的浓度为20μM；
2)将壳聚糖溶液和siRNA溶液按10：1的体积比加入含钙镁的汉克缓冲盐溶液中转染细胞，具体操作为：
将细胞提前一天接种于24孔板内，在转染当天将培养液换成含钙镁的HBSS，将壳聚糖溶液与siRNA溶液分别加入HBSS中，使得siRNA终浓度为40nM，转染4小时后换成普通培养液。
4.根据权利要求3所述的提高壳聚糖体外转运siRNA效率的方法，其特征在于，溶解壳聚糖采用pH为5.5且浓度为0.2M的醋酸钠缓冲液；溶解siRNA采用RNase-free水。
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