[发明专利]一种测定肽分子量的一体式阀切换二维液相色谱及其应用

权利要求书

1.一种二维液相色谱，其特征在于包括第一维液相色谱柱、第二维液相色谱柱、二维切换装置、第二维进样装置和样品环；

所述的第一维液相色谱柱和第二维液相色谱柱与二维切换装置连接；

所述的第二维液相色谱柱为凝胶色谱柱；

所述的二维切换装置和第二维进样装置都是多通阀，样品环连接在第二维进样装置的两个阀口之间；

第二维液相色谱需要装载标准品时，将标准品通过第二维进样装置与样品环连接的阀口注入样品环中；然后转动第二维进样装置切换一次卡位，各阀口的连通关系发生改变；第二维液相色谱的流动相依次流经二维切换装置、第二维进样装置、样品环，并再次流回二维切换装置，最终将样品环中的标准品送入第二维液相色谱柱中进行分析；

进行未知样品的肽分子量检测时，先将未知样品经第一维液相色谱柱分析，经检测后，细分的目标组分经二维切换装置流向第二维进样装置的样品环中，该环节也称二维采样；然后转动二维切换装置切换一次卡位，各阀口的连通关系发生改变；第二维液相色谱的流动相依次流经二维切换装置、第二维进样装置、样品环，并再次流回二维切换装置，最终将样品环中的目标组分送入第二维液相色谱柱中进行分析；

所述的第一维液相色谱柱为反相液相色谱柱、离子液相色谱柱或亲水作用色谱柱。

2.根据权利要求1所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的二维切换装置为十通阀。

3.根据权利要求1所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的第二维进样装置至少为六通阀。

4.根据权利要求1所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的二维液相色谱包括色谱泵、进样装置和检测器。

5.根据权利要求4所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的色谱泵是多泵或单泵。

6.根据权利要求4所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的色谱泵是高压、中压或低压液相泵。

7.根据权利要求4所述的二维液相色谱，其特征在于：所述的检测器为紫外检测器、示差检测器或激光散射仪。

8.权利要求1-7任一项所述的二维液相色谱在测定肽分子量中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于测定方法包括以下步骤：

（1）肽分子量标准品通过第二维液相色谱柱的单维分析得到其相应的保留时间，并以此作分子量对数-保留时间之间的关系曲线图，通过线性拟合得出二者之间的量化关系；

（2）样品首先经过第一维液相色谱柱的预分离得到不同的流出组分；

（3）流出组分在二维切换装置被切割并逐个转移至第二维液相色谱柱；

（4）第二维液相色谱柱对转移进来的组分进行色谱分离，检测样品流出组分的保留时间，结合步骤（1）中的分子量标准品校正曲线得出其对应分子量大小。