[发明专利]一种测定肽分子量的一体式阀切换二维液相色谱及其应用有效
申请号: | 201810034704.9 | 申请日: | 2018-01-15 |
公开(公告)号: | CN108398514B | 公开(公告)日: | 2020-02-18 |
发明(设计)人: | 赵谋明;徐巨才;郑淋;苏国万;何伟炜;陈雅君 | 申请(专利权)人: | 华南理工大学 |
主分类号: | G01N30/20 | 分类号: | G01N30/20 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 郭炜绵 |
地址: | 510640 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 测定 分子量 体式 切换 二维 色谱 及其 应用 | ||
本发明公开了一种测定肽分子量的一体式阀切换二维液相色谱及其应用,该二维液相色谱包括第一维液相色谱柱、第二维液相色谱柱、二维切换装置、第二维进样装置和样品环;其中的第一维液相色谱柱和第二维液相色谱柱与二维切换装置连接;第二维液相色谱柱为凝胶色谱柱;二维切换装置和第二维进样装置都是多通阀,样品环连接在第二维进样装置的两个阀口之间。本发明的二维液相色谱将凝胶色谱柱作为第二维液相色谱,可以借助于第一维液相色谱的高效分离,对目标组分或全组分进行一次预分离,再经第二维凝胶色谱分析测定其肽分子量情况,可大大降低被分析组分在凝胶柱中的复杂性,从而提高其分离效率和分析准确性。
技术领域
本发明属于仪器分析领域,具体涉及一种测定肽分子量的一体式阀切换二维液相色谱及其应用。
背景技术
凝胶液相色谱被广泛应用于蛋白、肽分子量的测定或酶解产物中分子量分布的测定。然而随着样品复杂性的逐渐升高,传统一维凝胶液相色谱的单柱分析因其分辨率较低,色谱峰常呈现共洗脱的现象,与其他物质的色谱峰存在不同程度地重叠,无法满足样品的分析需求。
为改善色谱分离效果,科研工作者报道了一种同系列不同规格凝胶液相色谱柱多柱串联同时进行色谱分离的方法,由于该方法采用直接串联的方法连接凝胶色谱柱,很大程度上仍受限于凝胶色谱柱本身,因此只能在一定程度上提高其色谱分辨率,此外,采用不同规格的多柱串联,存在不同溶质在不同柱内的串峰现象,即原本在第一根色谱柱中先出峰的溶质可能由于非筛分效应在第二根柱内后出峰,此外,多柱串联时由于不同色谱柱的分子量有效分离区间不一致,可能造成未知的溶质分子截留,即大分子物质可能在后续的小分子色谱柱中被截留,为此发展一种新型的肽分子量测定方法是当下亟需解决的问题。
二维液相色谱作为一种新兴的色谱分离技术,其分离效率远高于传统一维液相色谱,但由于凝胶色谱的分析速度受到色谱柱材料最大压降限制,无法对其进行快速分析,且其分辨率极低,因此其常作为第一维液相色谱使用,而极少将其作为第二维液相色谱,此外,凝胶色谱进行肽分子量测定时,若无激光散射仪辅助进行粒径和分子量测定,则需要创建分子量测定的标准曲线,而当前现有二维液相色谱方案均缺少对第二维液相色谱进样的支持,因此凝胶色谱在第二维液相色谱的应用和发展严重受阻。
发明内容
为了克服现有凝胶色谱测定肽分子量时存在的分辨率低、第二维凝胶色谱无法直接进样创建标准曲线的问题,本发明的首要目的在于提供一种以凝胶色谱为第二维液相色谱的二维液相色谱。将凝胶色谱柱作为第二维液相色谱,可以借助于第一维液相色谱的高效分离,对目标组分或全组分进行一次预分离,再经第二维凝胶色谱分析测定其肽分子量情况,可大大降低被分析组分在凝胶柱中的复杂性,从而提高其分离效率和分析准确性。
本发明的另一目的在于提供上述二维液相色谱在测定肽分子量中的应用,其分析方法以反相液相色谱、离子色谱或亲水作用色谱为第一维液相色谱,以凝胶色谱为第二维液相色谱分析方法,再辅以第二维液相色谱的进样支持用于创建凝胶色谱分子量校正曲线。在进行样品分析时,该方法利用第一维液相色谱对样品进行预先分离以降低流入凝胶色谱分析的样品复杂性和分析难度,从而提高了目标组分或全组分的分子量测定准确性。
本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种二维液相色谱,包括第一维液相色谱柱、第二维液相色谱柱、二维切换装置、第二维进样装置和样品环;
所述的第一维液相色谱柱和第二维液相色谱柱与二维切换装置连接;
所述的第二维液相色谱柱为凝胶色谱柱;
所述的二维切换装置和第二维进样装置都是多通阀,样品环连接在第二维进样装置的两个阀口之间;
所述的二维切换装置优选十通阀,所述的第二维进样装置至少为六通阀;
所述的二维液相色谱还包括色谱泵、进样装置和检测器;
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