[发明专利]一种杂交瘤细胞株、创伤弧菌膜蛋白单克隆抗体和创伤弧菌检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种杂交瘤细胞株、创伤弧菌膜蛋白单克隆抗体和灵敏度高、特异性好的创伤弧菌检测试剂盒，属于创伤弧菌免疫检测领域。所述杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2016146。所述创伤弧菌检测试剂盒包括以下组分：酶标板、创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体、HRP酶标记鼠抗、封闭液、抗体稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照品和空白对照品。本发明提供的创伤弧菌检测试剂盒能够特异性检测创伤弧菌，灵敏度高，对创伤弧菌膜蛋白样品的最低检测限为78ng。

技术领域

本发明属于创伤弧菌疾病特异性检测技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株、创伤弧菌膜蛋白单克隆抗体和创伤弧菌检测试剂盒。

背景技术

创伤弧菌是公认的人鱼共患病的条件致病菌，对近海和河口环境的鳗鱼、黄姑鱼、牡蛎、大菱鲆、石斑鱼等水产名贵经济动物以及养殖从业人员危害大，该菌分为生物I型、生物II型、生物III型3个生物型，一般感染创伤弧菌生物I型的病人致死率高达60％以上；创伤弧菌生物II型主要感染鳗鲡等咸淡水养殖品种，导致感染鱼大量死亡，造成严重经济损失。因此，创伤弧菌疾病的诊断与预防尤为重要和关键，目前创伤弧菌病还缺乏快速、准确的诊断方法和免疫监测手段。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种杂交瘤细胞株、创伤弧菌膜蛋白单克隆抗体和灵敏度高、特异性好的创伤弧菌检测试剂盒，所述试剂盒可应用于创伤弧菌病疫苗免疫效果评价、免疫应答水平监测，以及水产动物创伤弧菌病的快速诊断。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C2016146。

本发明还提供了一种创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体，所述单克隆抗体由上述的杂交瘤细胞株分泌产生。

本发明还提供了一种创伤弧菌检测试剂盒，包括以下组分：酶标板、创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体、HRP酶标记鼠抗、封闭液、抗体稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照品和空白对照品。

优选的，所述创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体腹水效价大于1：128000。

优选的，所述抗体稀释液为质量浓度0.8～1.2％的BSA-PBST溶液。

优选的，所述抗体稀释液的pH值为7.1～7.3。

优选的，所述封闭液为质量浓度1.6～2.4％的BSA-PBST溶液。

优选的，所述的洗涤液为PBST溶液；所述洗涤液的pH值为7.0～7.4。

优选的，所述显色液包括底物显色A液和底物显色B液；所述底物显色 A液包括26～28g/L的醋酸钠，3.0～3.5g/L的柠檬酸，0.5～0.7ml/L30wt％的双氧水；所述底物显色B液包括0.35～0.45g/L的乙二胺四乙酸二钠，1.8～2.0g/L的柠檬酸，90～110ml/L的甘油，0.28～0.32g/L的四甲基联苯胺；在使用所述显色液前将等体积的底物显色A液和底物显色B液混匀。

优选的，所述终止液为质量浓度0.10～0.11％的硫酸溶液。

本发明的有益效果：本发明提供的杂交瘤细胞株能够分泌产生创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体，所述创伤弧菌膜蛋白IgG单克隆抗体的效价高，腹水效价大于1：128000；采用该单克隆抗体，酶标板、HRP酶标记鼠抗、封闭液、抗体稀释液、洗涤液、显色液、终止液、阳性对照品和空白对照品组成一种创伤弧菌检测试剂盒，该试剂盒能够特异性检测创伤弧菌，灵敏度高，对创伤弧菌膜蛋白样品的最低检测限为78ng。

附图说明

图1为实施例1中创伤弧菌膜蛋白的分离纯化SDS-PAGE电泳图；