[发明专利]一种改进的反转录microRNA的方法在审
| 申请号： | 201810035784.X | 申请日： | 2018-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN108192890A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 孙剑勇;陈艮文 | 申请（专利权）人： | 复旦大学附属中山医院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 周春洪 |
| 地址： | 200032 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 反转录 茎环法 检测 改进 分子检测 总RNA | ||
【权利要求书】：
1.一种改进的反转录microRNA的方法，其特征在于，采用mRNA反转录酶，按照如下反转录体系进行反转录：
试剂 终浓度 5×PrimerScript Buffer 1× PrimerScript RT Enzyme MixI 0.5ul 茎环引物(10uM) 2pmol Total RNA 100～500ng 2O]]> 定容至10ul
2.根据权利要求1所述反转录microRNA的方法，其特征在于，反转录条件为：37℃15min，85℃5sec。
3.根据权利要求1所述反转录microRNA的方法，其特征在于，反转录条件为：42℃15min，85℃5sec。
4.根据权利要求1所述反转录microRNA的方法，其特征在于，反转录条件为：50℃15min，85℃5sec。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反转录酶为Takara公司商品号为RR037A的mRNA反转录酶，活力值为1U。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述茎环引物包括两部分，通用的茎环序列和与靶标miRNA3’端互补配对的特异引物序列。
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