[发明专利]一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条

权利要求书

1.一种EV71病毒IgA抗体检测试纸条，包括样品垫、标记垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和背板，其特征在于，所述的硝酸纤维素膜上设有包被抗原的检测线和人IgA抗体的对照线，标记垫中含有抗人IgA抗体量子微球标记物；

所述的抗原包括EV71病毒VP2蛋白抗原多肽，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1；所述的抗原的包被浓度为1mg/ml；

所述的人IgA抗体包被浓度为1.5mg/ml；

所述的抗原是EV71病毒VP2蛋白抗原多肽与BSA蛋白的交联产物；

所述的抗原是采用马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯作为交联剂，将EV71病毒VP2蛋白抗原多肽与BSA蛋白交联后的交联产物；

所述的EV71病毒VP2蛋白抗原多肽与BSA蛋白的交联产物是通过以下方法制备的：

称量3mg马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯溶解在二甲基酰胺中，配置成浓度为10mM的马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯溶液，将3mg BSA溶解在1ml 10mM pH7.2的PBS中，加入10mM马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯溶液100μl，室温下磁力搅拌10-30min得到BSA/马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯溶液，采用sepharose G25层析柱纯化BSA/马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯溶液，使用50mM pH6.0的PBS平衡柱子和洗脱蛋白，收集BSA/马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯蛋白，将5mg EV71病毒VP2蛋白抗原多肽溶解在100μL二甲基酰胺中，然后加入1ml纯化的BSA/马来酰亚胺基苯甲酸琥珀酰亚胺酯蛋白，迅速混匀，马上加入30μl 2N NaOH溶液调整液体pH值在7.0-7.2，最后将反应完成的蛋白溶液室温透析3-6小时，透析缓冲液为10mM pH7.2的PBS，中间换液2-5次，由此得到EV71病毒VP2蛋白抗原多肽-BSA蛋白分装，即为EV71病毒VP2蛋白抗原多肽与BSA蛋白的交联产物。

2.根据权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，所述抗人IgA抗体为羊抗人IgA多克隆抗体、鼠抗人IgA单克隆抗体、兔抗人IgA单克隆抗体或兔抗人IgA多克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条，其特征在于，所述的抗人IgA抗体量子微球标记物为抗人IgA抗体CdTe/ZnSe量子点微球标记物。

4.一种EV71病毒IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的EV71病毒IgA抗体检测试纸条和唾液采集棒，所述的唾液采集棒包括采集杆和杆头的唾液吸附材料，所述的唾液吸附材料为聚酯棉或脱脂棉。

5.根据权利要求4所述的EV71病毒IgA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的EV71病毒IgA抗体检测试剂盒还含有样本稀释液，其配方是：质量分数0.2％BSA+质量分数0.1％酪蛋白+体积分数0.25％Tween-20+体积分数0.1％procline-300+10mM PBS，溶剂为水，pH7.2。