[发明专利]一种载EGCG的卵清蛋白纳米粒子的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种载表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin Gallate，EGCG）的卵清蛋白（ovalbumin,OVA）纳米粒子的制备方法及其应用。首先通过加热自组装方法制备成功载EGCG的卵清蛋白纳米粒子，然后对其进行了多项理化性质的表征。该种纳米粒子具有较窄的粒径分布，较高的载药量（40±3μg/mg）以及良好的药物控释效果（24小时释放50%）。本发明将具有天然抗炎性能的EGCG与卵清蛋白自组装成纳米粒子，从而降低了EGCG在到达病灶部位之前的氧化，改善了EGCG的药代学特性，提高了其在体内的半衰期，增强了EGCG对溃疡性结肠炎的治疗效果。

技术领域

本发明属于纳米药物载体技术领域，具体涉及一种载EGCG的卵清蛋白纳米粒子制备方法、表征和应用。

背景技术

溃疡性结肠炎（Ulcerative colitis, UC）是炎症性肠病中最重要的一种，其病因可能包括环境、感染、免疫和遗传等因素。携带某些特殊基因的人群可能更易患UC。据资料显示，溃疡性结肠炎在欧美国家发病率较高，以美国为例，发病率高达2‰。UC通常随着时间推移，症状逐渐恶化。随着国民生活水平的提高，UC在中国近年报道的病例也明显增多，综合多家医院病例的统计推测，溃疡性结肠炎的患病率为11.6/10万，实际病例可能更多。UC已成为中国消化系统常见疾病和慢性腹泻的主要原因，且患者多为青壮年，因此日益受到重视。

天然活性物质具有消炎、抗癌、抗氧化等生理活性，广泛分布于多种植物，海洋生物和微生物中，目前天然活性物质的开发和研究已成为国内外药品、食品研究和生命科学研究的热点。本发明中所用到的EGCG即为从茶叶中提取的生物活性物质儿茶素的主要成分，但是天然活性物质也有不可避免的缺陷，大多数天然活性物质稳定性差，易被氧化，且易在碱性或酸性条件下分解，所以研究开发优良的药物递送系统非常必要。近几年来，新颖的药物递送系统已经成为药剂学领域研究的热门，各种研究成果已被广泛应用，其中纳米载体药物递送系统则是新型药物递送系统研究的主流，而纳米载体药物递送系统研究的重点是寻找或合成具有生物相容性好、可降解、低生物毒性等优良性能的载体材料。

因此，我们用卵清蛋白这个生物相容性好、低毒性、来源广泛的球蛋白与具有良好抗炎性能的天然活性物质EGCG自组装制备成为新型的药物递送体系，给UC治疗提供一个切实可行的治疗试剂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种载EGCG的卵清蛋白纳米粒子，其具有良好的生物相容性，稳定性，可用于溃疡型结肠炎的治疗，本发明的目的之二在于提供上述载EGCG的卵清蛋白纳米粒子的制备方法。

为实现上述发明目的，技术方案为：

载EGCG的卵清蛋白纳米粒子的制备方法包括以下步骤：

（1）称取卵清蛋白（OVA）于50 mL的离心管中，然后加入pH 6.6的PBS缓冲液，涡旋充分溶解，水化过夜；

（2）将水化过夜的卵清蛋白溶液离心后收集上清液，除去不溶杂质；

（3）将步骤（2）中的所得的溶液在80℃水浴中保持20 min；

（4）将步骤（3）的溶液水浴结束后,往溶液中立刻加入EGCG，此时溶液变成乳浊液；

（5）将步骤（4）得到的含EGCG的乳浊液涡旋30 s，然后立刻用流水冷却至室温；

（6）将步骤（5）得到的乳浊液液立刻放入冰浴中，探头超声1 min;

（7）将步骤（6）得到的乳浊液液低度离心收集上清液；

（8）将步骤（7）得到的上清液再次进行离心后，弃去上清液，收集粒子；

（9）将步骤（8）收集的粒子重新悬浮在二次水，冷冻干燥后放入-20℃冰箱储存备用。