[发明专利]一种CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种CYFRA21‑1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：CYFRA21‑1校准品；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的CYFRA21‑1抗体；CYFRA21‑1抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；CYFRA21‑1质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。另外本发明还公开了本发明试剂盒的制备方法。本发明试剂盒与现有试剂盒相比敏感性高、可测定浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单、检测自动化程度高等优点。

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

CYFRA21-1是细胞质角蛋白片段19的缩写，细胞质角蛋白（Cytokeratin）是构成上皮细胞间丝状体亚基的结构蛋白，在多种正常上皮组织中存在，完整的细胞角蛋白的可溶性较差，但其片段可溶于血液中并被检测，CYFRA21-1（Cytokeratin 19 Fragment）能够被单克隆抗体识别，分子量约为30KD。

CYFRA21-1存在于肺癌、食道癌等上皮起源的肿瘤细胞的细胞质中，是监测非小细胞肺癌的首选肿瘤标记，各类非小细胞肺癌阳性检出率为70%-85%。CYFRA21-1也可用于监测横纹肌浸润性膀胱癌、良性肺部疾病（肺炎，结核，慢性支气管炎，支气管哮喘，肺气肿），CYFRA21-1的血清浓度水平的高低与肿瘤临床分期正相关，可作为肺癌手术和放化疗后追踪早期复发的有效指标。

目前检测CYFRA21-1的方法有时间分辨免疫荧光分析法，采用长效荧光标记物如稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy)标记，通过明间分辨非特异性荧光，但是此方法需要利用稀土金属，成本高，标记难度大，不易得。

另外检测CYFRA21-1的最常用方法是化学发光免疫分析法，磁微粒化学发光免疫分析法，较以前的放射免疫分析法、酶联免疫分析法，在检测灵敏度、检测范围、检测时间及自动化操作上有了大大提高，且没有污染，得到临床工作者的青睐。

现有技术普遍采用荧光素体系，此体系试剂盒有效期短，不稳定，测值上仍然不够精确；另有技术是在磁微粒上直接联抗体，操作难度高，不易得。

发明内容

本发明要解决的问题是提供CYFRA21-1的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，测值不够精确，检测范围窄，成本高，保质期短的缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：CYFRA21-1磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：CYFRA21-1校准品；偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液；生物素标记的CYFRA21-1抗体；CYFRA21-1抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ ≥ 3.0，活性≥ 250U/mL；CYFRA21-1质控品，质控品包括浓度10ng/mL的低值质控品和200ng/mL的高值质控品；化学发光液A液和B液，A液为5mmol/L， pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.08g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲；20倍浓缩洗液；反应管。

进一步，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径10-50nm。

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

（1）CYFRA21-1校准品的配制：

将CYFRA21-1抗原用山羊血清配制成校准品浓储液，以国家校准品进行定标，将浓储液用山羊血清稀释至工作浓度，分别为1，5，20，100，300ng/mL，即为校准品浓度；