[发明专利]一种脂氧酶以及7S球蛋白双缺失的大豆新种质的建立方法

说明书

本发明公开了一种脂氧酶以及7S球蛋白双缺失的大豆新种质的建立方法。该方法利用本发明改良的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法从大豆种质中筛选获得7S球蛋白的α、α'与β三个亚基同时缺失的大豆品种，然后以脂氧酶三个同工酶同时缺失的东富豆3为母本，以7S球蛋白三个亚基同时缺失的大豆品种为父本配置杂交组合，利用本发明改良的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，进行7S球蛋白与脂氧酶缺失检测，获得脂氧酶以及7S球蛋白同时缺失的大豆新种质。该方法不但可以降低检测成本、节约检测时间2倍以上，还可以降低检测废弃物的排放2倍以上，减低环境污染，更重要的是它解决了基因聚合育种过程中低世代分析检测的瓶颈，为大豆品质改良育种提供了最佳的检测方法。

技术领域

本发明涉及一种大豆种质的检测方法，特别涉及一种同时检测大豆中脂氧酶以及7S球蛋白双缺失的方法。本发明属于农业生产与加工技术领域。

背景技术

长期以来，我国的大豆深加工企业，如大豆分离蛋白企业、豆粉加工企业、素肉加工企业等，因无加工专用大豆原料，生产的大豆分离蛋白凝胶成胶性与稳定性差，产品加工去腥味难，导致以分离蛋白为添加料的肉制品企业生产的肉制品的货架期(保质期)缩短，产品腥味难以去净，企业为了延长产品货架期，不得不通过加热或化学手段提高其凝胶性问题，通过加热、酶包埋等加工技术去除腥味，这样既提高了企业的加工成本，又严重影响企业的产品质量与经济效益。因此，如果用于加工的大豆材料本身就具备蛋白凝胶成胶性与稳定性好且没有豆腥味，胱氨酸与甲硫氨酸等营养氨基酸含量高的特点，就解决了企业的难题。通常做法，就是通过培育具备7S球蛋白亚基缺失的高11S球蛋白含量的大豆新品种、培育脂氧酶缺失的品种，来实现企业这种诉求，才能做到事半功倍的效果。

目前为止，我国尚没有7S球蛋白亚基缺失的大豆新品种育成，脂氧酶三个同工酶同时缺失的春大豆也没有育成，只有脂氧酶部分缺失的春大豆品种，和一个脂氧酶完全缺失的夏大豆类型品种育成。通过基因聚合育种手段，将7S球蛋白亚基与脂氧酶缺失性状同时聚合到一个品种中去，是解决该问题的一个重要途径，但在这个过程中，对杂交后代双缺失检测方法的开发，是制约双缺失品种育成的瓶颈。即如何在F2性状分离世代，切取微量种子的粉末，就能够对种子成分进行检测分析，在早期世代发现目标种子，又不影响目标种子的继续进行正常的生长发育，获得后代，乃至性状稳定后，才能参与品种审定程序，获得品种审定证书。

现有技术分析检测7S球蛋白亚基和脂氧酶缺失方法，若要同时判明这种成分缺失与否，必须单独取样、单独检测，对于同一粒种子而言，取两次样后，即便得到的分析检测结果符合育种目标要求，需要将取样后的种子进行后代繁殖，该种子会因为伤害过多，而丧失生命力，导致育种失败。

因此，目前急需提出一种只经一次取样就可同时完成大豆中脂氧酶以及7S球蛋白缺失检测的方法，而不破坏种子的繁育能力。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种通过一次痕量取样，即可完成7S球蛋白的3个亚基(α、α'与β)与脂氧酶的3个同工酶(lox-1，2，3)同时进行分析检测的方法；

本发明的目的之二在于提供一种脂氧酶以及7S球蛋白双缺失的大豆新种质的建立方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

一种同时检测大豆中脂氧酶三个同工酶以及7S球蛋白α、α'与β三个亚基缺失的方法，其包括以下步骤：

(1)痕量取样：采用半粒切取法或者垂直钻取法进行取样；

1)半粒切取法：用裁纸刀片在大豆种脐相反侧，用刀片逐粒纵向切取5-8mg子叶粉末，并按顺序逐粒放入96孔板，加盖，5℃低温保存待分析，保存时间若超过2周，放入-20℃冷冻保存；

2)垂直钻取法：以钻头的牙科用打磨钻，替代裁纸刀片，垂直于子叶正面，钻去子叶粉末5-8mg，按顺序逐粒放入96孔板，加盖，5℃低温保存待分析，保存时间若超过2周，放入-20℃冷冻保存。