[发明专利]脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法、血管细胞及其应用

权利要求书

1.一种脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞，并于36℃～38℃下培养3小时～4小时，使得所述脂肪间充质干细胞发生重编程，其中，所述携带ETV2转录因子的腺病毒的病毒滴度为180PFU～240PFU；及

将重编程后的所述脂肪间充质干细胞置于血管细胞分化培养基中分化培养，得到所述血管细胞。

2.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述将重编程后的所述脂肪间充质干细胞置于血管细胞分化培养基中分化培养的操作中，所述血管细胞分化培养基含有质量百分含量为2％～5％的培养添加物，所述培养添加物包括胎牛血清、肝素、人源内皮细胞生长因子、抗坏血酸及两性霉素B，培养时间为72小时～96小时。

3.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述携带ETV2转录因子的腺病毒通过如下方法制备得到：

将ETV2转录因子插入质粒pShuttle-CMV内，得到pShuttle-CMV-ETV2质粒；

将所述pShuttle-CMV-ETV2质粒与pAdEasy-2质粒以摩尔比为1.5：1～2.5：1混合，并转入感受态细胞中，培养得到腺病毒重组质粒；及

用所述腺病毒重组质粒转染293A细胞，培养转染后的所述293A细胞并收集培养上清，得到所述携带ETV2转录因子的腺病毒。

4.根据权利要求3所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述将所述腺病毒重组质粒转染293A细胞，培养转染后的所述293A细胞并收集培养上清的操作具体如下：

将所述腺病毒重组质粒线性化，用线性化的所述腺病毒重组质粒转染所述293A细胞，培养转染后的所述293A细胞并收集培养上清，得到原代腺病毒；

用所述原代腺病毒转染所述293A细胞并培养，收集培养上清，得到二代腺病毒；及

用所述二代腺病毒转染所述293A细胞并培养，收集培养上清，得到所述携带ETV2转录因子的腺病毒。

5.根据权利要求3所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述用所述腺病毒重组质粒转染293A细胞的操作之前，预先培养所述293A细胞至汇合度为60％～70％。

6.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞的操作之前，还包括将所述脂肪间充质干细胞培养至汇合度为30％～40％。

7.根据权利要求1所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，其特征在于，所述脂肪间充质干细胞为人脂肪间充质干细胞，所述血管细胞为血管内皮细胞。

8.一种血管细胞，其特征在于，通过权利要求1～7任一项所述的脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法制备得到。

9.如权利要求8所述的血管细胞在制备医用功能材料中的应用。

10.一种治疗血管疾病的药物，其特征在于，包括权利要求8所述的血管细胞。