[发明专利]脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法、血管细胞及其应用

说明书

本发明涉及一种脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法、血管细胞及其应用。该脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，包括以下步骤：用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞并培养，使得脂肪间充质干细胞发生重编程；及将重编程后的脂肪间充质干细胞置于血管细胞分化培养基中分化培养，得到血管细胞。上述方法能够将脂肪间充质干细胞直接转分化成血管细胞，且转分化的效率高。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法、血管细胞及其应用。

背景技术

心脑血管疾病是心脏血管和脑血管疾病的统称，泛指由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等所导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病。心脑血管疾病严重威胁人类的健康，具有高患病率、高致残率和高死亡率的特点。虽然通过传统药物及外科手术等手段重建血液运输系统，能够在一定程度上缓解心脑血管疾病的临床症状，但是这种治疗方法需要长期服用药物或经受手术的痛苦，且不能从根本上治疗心脑血管疾病。

日本的Shinya Yamanaka于2006年首次公开通过Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4这4种转录因子导入小鼠成纤维细胞中，成纤维细胞经4种转录因子的诱导下进行基因的重新编排，得到一种与胚胎干细胞类似的细胞，命名为诱导性多能干细胞(iPS细胞，inducedpluripotent stem cells)。iPS细胞的发现将干细胞研的究和再生医学推向了一个全新的高度。通过iPS细胞治疗心脑血管疾病成为了研究的热门。

然而，传统的方法一般是通过将成纤维细胞重编程为iPS细胞，再诱导iPS细胞分化成血管内皮细胞，操作繁琐和复杂，同时由于成纤维细胞转换为iPS细胞的效率较低，限制了iPS细胞向血管内皮细胞的分化，进而使得由成纤维细胞向血管细胞转化的效率较低，不能满足实际需要。

发明内容

基于此，有必提供一种脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法。该方法能够将脂肪间充质干细胞直接转分化成血管细胞，且转分化的效率高。

此外，提供一种血管细胞及其应用。

一种脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，包括以下步骤：

用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞，并于36℃～38℃下培养3小时～4小时，使得所述脂肪间充质干细胞发生重编程，其中，所述携带ETV2转录因子的腺病毒的病毒滴度为180PFU～240PFU；及

将重编程后的所述脂肪间充质干细胞置于血管细胞分化培养基中分化培养，得到所述血管细胞。

上述脂肪间充质干细胞转分化制备血管细胞的方法，用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞，由于腺病毒无薄膜结构，不会诱发宿主的免疫反应，因此通过腺病毒携带ETV2转录因子的安全性较高。同时，用携带ETV2转录因子的腺病毒感染脂肪间充质干细胞能够使脂肪间充质干细胞直接转分化成血管细胞，无需经过重编程为iPS细胞的过程，操作简单。

在其中一个实施例中，所述将重编程后的所述脂肪间充质干细胞置于血管细胞分化培养基中分化培养的操作中，所述血管细胞分化培养基含有质量百分含量为2％～5％的培养添加物，所述培养添加物包括胎牛血清、肝素、人源内皮细胞生长因子、抗坏血酸及两性霉素B，培养时间为72小时～96小时。

在其中一个实施例中，所述携带ETV2转录因子的腺病毒通过如下方法制备得到：

将ETV2转录因子插入质粒pShuttle-CMV内，得到pShuttle-CMV-ETV2质粒；

将所述pShuttle-CMV-ETV2质粒与pAdEasy-2质粒以摩尔比为1.5：1～2.5：1混合，并转入感受态细胞中，培养得到腺病毒重组质粒；及