[发明专利]双载体系统及其用途有效
| 申请号： | 201810041670.6 | 申请日： | 2015-03-05 |
| 公开（公告）号： | CN108251431B | 公开（公告）日： | 2020-12-08 |
| 发明（设计）人： | 刘志刚;沈世杰;刘玉兰;郭晶晶;郝小勃 | 申请（专利权）人： | 北京百特美博生物科技有限公司;北京智仁美博生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/13 | 分类号： | C12N15/13;C12N15/70;C07K16/24;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人： | 王达佐;洪欣 |
| 地址： | 100079 北京市丰*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 载体 系统 及其 用途 | ||
1.一种用于在细菌中表达Fab抗体片段的双质粒系统，包含第一质粒和第二质粒，其中：
所述第一质粒包含抗体轻链(VL-CL)表达单元，所述第二质粒包含抗体重链VH-CH1表达单元；
所述第一质粒和第二质粒包含在所述细菌中相容的不同复制原点，其中所述不同复制原点分别为pBR ori和SEQ ID NO：20所示的CDF ori；并且
所述抗体轻链表达单元和抗体重链VH-CH1表达单元使用相同的原核启动子。
2.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述细菌为大肠杆菌。
3.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述启动子为可诱导启动子。
4.如权利要求3所述的双质粒系统，其中所述启动子为阿拉伯糖启动子(Para)或者乳糖启动子(Plac)。
5.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述抗体轻链恒定区为SEQ ID NO：17所示的kappa轻链恒定区或者SEQ ID NO：19所示的lambda轻链恒定区。
6.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述重链恒定区CH1段选自IgG1、IgG2、IgG3或者IgG4亚型。
7.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述第一质粒和第二质粒包含不同抗生素抗性基因。
8.如权利要求7所述的双质粒系统，其中所述抗生素抗性基因选自氨苄青霉素抗性基因(Ampr)、氯霉素抗性基因(CmR)、卡那霉素抗性基因(KaR)或者四环素抗性基因(TetR)。
9.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述第一质粒和第二质粒包含相同的编码信号肽的核酸分子。
10.如权利要求9所述的双质粒系统，其中所述信号肽为SEQ ID NO：6所示的PelB信号肽。
11.如权利要求1所述的双质粒系统，其中所述第一质粒包含氯霉素抗体基因(CmR)和SEQ ID NO：20所示的CDF ori，第二质粒包含氨苄青霉素抗性(Ampr)和pBR ori。
12.如权利要求1所述的双质粒系统，其包含SEQ ID NO：18所示的融合基因。
13.权利要求1-12中任一项所述的双质粒系统在制备Fab抗体片段中的用途。
14.权利要求1-12中任一项所述的双质粒系统在噬菌体呈现Fab抗体或Fab抗体库中的用途。
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